導語：如何才能寫好一篇包干合同，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

承包方：____________（簡稱乙方），地址_________________，企業(yè)經(jīng)營者：____________。

甲乙雙方根據(jù)__________________，經(jīng)協(xié)商訂本合同。

一、承包形式為上繳利潤遞增包干。

二、承包期限自_____年_____月_____日止，共______年。

三、上繳利潤數(shù)額

1．乙方以________元為上繳利潤包干基數(shù)，自______年起，按平均遞增_____％的比例上繳利潤，即_____年為________元，_____年為________元，______年為__________元。

2．上繳利潤后剩余部分，全部留給乙方，由乙方首先歸還國歌，然后建立生產(chǎn)發(fā)展基金、獎勵基金和職工福利基金。各項基本比例為：

生產(chǎn)發(fā)展基金

獎勵基金

福利基金

備注

年

年

年

3．乙方完不成上繳利潤時，其差額由乙方用當年留利抵交。不足時，用企業(yè)資金抵交。

四、承包期間，乙方保證完成國家的指令性計劃：_______________________________。

五、主要經(jīng)濟技術(shù)指標

1．乙方保證______年達到_________企業(yè)標準，______年達到_________企業(yè)標準。

2．承包期間，新增固定資產(chǎn)總額為________元，其中______年________元，______年_________元，______年________元。

3．新產(chǎn)品開發(fā)數(shù)分別為：________年_____個，________年_____個，_________年_______個；主要項目是_________新產(chǎn)品產(chǎn)值率為：______年________，_____年________，_____年_________。

4．承包期間技術(shù)改造投資總額共________元，新增總產(chǎn)值________元，利潤________元。

5．承包期間產(chǎn)品質(zhì)量達到______級標準，新創(chuàng)____________________。

六、承包期間，甲方有權(quán)對乙方的經(jīng)營管理活動進行監(jiān)督和檢查；有權(quán)_________________。

承包期間，甲方必須尊重乙方自主權(quán)，不干預(yù)乙方正常經(jīng)營活動；并幫助乙方解決下述問題：_______________。

七、承包期間，乙方享有國家法律、法規(guī)、政策規(guī)定的經(jīng)營管理自主權(quán)。

企業(yè)經(jīng)營者_________為乙方法定代表人，對企業(yè)經(jīng)營管理中的下列事項，有依法自主決定的權(quán)利：

（一） ____________________________________________；

（二）_____________________________________________；

（三）_____________________________________________。

八、違約責任

1．甲方無理干擾乙方的生產(chǎn)經(jīng)營活動，給乙方造成損失的，從上繳利潤中扣除賠償金額。賭償金的計算方法為__________

2．甲方不按合同第_____條規(guī)定為乙方解決________問題時，按_________的______％交付違約金，違約金從上交利潤中扣除。

3．乙方未按合同完成上繳利潤總額或年度上繳利潤額，按下述辦法交付違約金：_____________________。

4．乙方未實現(xiàn)第______條規(guī)定的經(jīng)濟技術(shù)指標的，按下述辦法納違約金；未實現(xiàn)企業(yè)升級時，_________；新增固定資產(chǎn)達不到規(guī)定數(shù)額時_________；技術(shù)改造任務(wù)未完成時，____________；產(chǎn)品質(zhì)量未達到規(guī)定標準時，______________。

5．乙方承包期間，給企業(yè)財產(chǎn)造成損害的，按下述辦法支付賠償金：____________。

九、企業(yè)經(jīng)營者的獎懲

乙方完不成承包指標時，分別下列情況對企業(yè)經(jīng)營者進行處罰：

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

乙方完成或超額完成承包指標時，分別下列情況，對企業(yè)經(jīng)營者進行獎勵：

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

十、合同的變更和解除

1．___________________________________________________。

2．___________________________________________________。

3．___________________________________________________。

4．___________________________________________________。

十一、爭議的解決方式

因本合同發(fā)生爭議時，雙方應(yīng)協(xié)商解決，協(xié)商不成時，以下列第______種方式解決

1．交___________仲裁委員會仲裁；

2．交___________法院審判。

十二、本合同自_____時起生效。

合同正本一式2份，甲、乙雙方各執(zhí)1份，副本一式_____份，分送______________。

甲方：（公章）__________________

地址：__________________________

法定代表人（簽章）：____________

人（簽章）：________________

乙方：（公章或個人簽章）________

地址：__________________________

企業(yè)經(jīng)營者（簽章）：____________

簽約日期：_______年____月_____日

篇2

承包方：_________，簡稱乙方；

企業(yè)經(jīng)營者：_________。

甲、乙雙方根據(jù)_________，經(jīng)協(xié)商簽訂本合同。

一、承包形式

上繳利潤定額包干，超額全留。

二、承包期限

自_________年_________月_________日起至_________年_________月_________日止，共_________年。

三、上交利潤定額

1．乙方在_________年內(nèi)，上交利潤總額為_________元。其中，_________年_________元，_________年_________元，_________年_________元。

2．超出定額部分的利潤，全部留給乙方。

3．乙方應(yīng)根據(jù)留利數(shù)額，建立生產(chǎn)發(fā)展基金，獎勵基金和福利基金。三項基金的比例為：_________。

四、經(jīng)濟技術(shù)指標

_________。

五、技術(shù)改造任務(wù)

_________。

六、承包前債權(quán)債務(wù)的處理辦法

_________。

七、貸款歸還辦法

_________。

八、承包期間，甲方有權(quán)根據(jù)法律和合同的規(guī)定監(jiān)督檢查乙方的生產(chǎn)經(jīng)營情況；有權(quán)_________；承包期間，甲方不得在法律和合同的規(guī)定之外隨意干涉乙方的生產(chǎn)經(jīng)營活動并有義務(wù)_________。

九、承包期間，乙方享有國家法律、法規(guī)、政策規(guī)定的經(jīng)營管理自主權(quán)。企業(yè)經(jīng)營者為乙方法定代表人，對企業(yè)經(jīng)營管理中的下列事項，有依法自主決定的權(quán)利：_________。

十、違約責任

_________。

十一、對企業(yè)經(jīng)營者的獎懲

_________。

十二、爭議的解決辦法

_________。

十三、其他有關(guān)事項

_________。

十四、本合同自_________時起生效。合同正本_________，副本_________。

甲方（蓋章）：_________乙方（蓋章）：_________

法定代表人（簽字）：_________　法定代表人（簽字）：_________

_________年____月____日_________年____月____日

簽訂地點：_________簽訂地點：_________

篇3

關(guān)鍵詞：公路工程；單價和包干混合式合同；管理模式；應(yīng)用

引言

采用單價和包干混合式合同管理模式進行公路工程建設(shè)時，除了合同所規(guī)定的分部分項工程在變更后可以相應(yīng)調(diào)整單價外，其他分部分項工程無論變更與否均實行按固定總價包干。

1 單價和包干混合式合同管理模式的基本做法

1.1 合同有關(guān)規(guī)定 就公路工程而言，特殊防護加固工程、擋土墻、紅線范圍以外的改路、改河、改渠、管線改移等工程、橋梁結(jié)構(gòu)、橋梁樁基礎(chǔ)、涵洞、通道或渡槽、隧道工程、供、配電工程、收費、監(jiān)控、通信三大系統(tǒng)工程以及照明和消防工程等分部分項工程都適合采用單價形式進行招標和結(jié)算，即構(gòu)成單價項目，發(fā)生變更后允許相應(yīng)增加或減少單價，從而引起合同總價的變化。

除此之外的分部分項工程構(gòu)成包干項目。

1.2 合同配套措施 招標人在招標文件中設(shè)置了“風險金”項目，并列入工程量清單中，規(guī)定由投標人根據(jù)自身經(jīng)驗和實力，在仔細研究招標文件和勘察工程現(xiàn)場，并充分預(yù)測工程實施成本及潛在風險后自行報價。此外還規(guī)定，對主要材料市場價格變動超過一定范圍時，除了對單價項目調(diào)價外，還應(yīng)按施工圖在合同工期內(nèi)對包干項目程給予調(diào)價。

1.3 單價項目和包干項目劃分的影響因素 在選擇和界定單價項目與包干項目范圍時，主要考慮以下幾個方面因素：

（1）國家政策、法律法規(guī)的變化等投標人無法預(yù)測其變化，或即使能預(yù)測其變化卻難以預(yù)測其變化規(guī)模的因素；

（2）大型結(jié)構(gòu)物的增設(shè)或取消、隧道圍巖地質(zhì)出現(xiàn)異常情況等一旦發(fā)生變更對造價影響較大，承包商在競爭性投標報價中又難以充分考慮的項目；

（3）擋土墻、邊坡特殊防護等以目前的勘察設(shè)計普遍水平仍然無法保證達到包干深度的工程項目；

（4）附屬設(shè)施的預(yù)留、預(yù)埋及暫定工程量項目等由招標人（業(yè)主）自行預(yù)測和把握今后隨方案改動而作變更的項目；

（5）原材料市場價格波動幅度過大等投標人無法掌控的情況。

2 單價和包干混合式合同管理模式遇到的問題

2.1 有些承包商對新的合同條件還不能完全適應(yīng) 單價與包干混合式合同把工程量變化的風險更多地歸給了承包商，把施工生產(chǎn)要素價格變化的風險更多地歸給了業(yè)主。一些承包商管理不善，重視不夠，風險應(yīng)對的能力較差，特別當出現(xiàn)包干項目變更增加造價較多的情況時，一些項目部在生產(chǎn)要素投入上缺乏自，其上級單位的支持和扶助如不能及時到位，現(xiàn)場組織會比較困難。

2.2 有些承包商將包干后的成本風險失誤，導致內(nèi)部管理不暢 承包商將包干后的成本風險轉(zhuǎn)嫁到下屬作業(yè)隊身上，由于工程分包和勞務(wù)協(xié)作隊伍的實力參差不齊，分包和勞務(wù)管理行為還有待規(guī)范，大部分作業(yè)隊無法承擔也不愿意承擔包干的風險，因此在施工到了一定階段后，承包商內(nèi)部合同爭議和經(jīng)濟糾紛明顯增多，甚至出現(xiàn)作業(yè)隊拖欠農(nóng)民工工資，停工要挾項目部追加合同工程款的情況，對工程進度影響較大。

2.3 部分工程變更內(nèi)業(yè)資料的完善不夠及時 由于包干項目變更后合同價款沒有變化，承包商對這些變更的資料手續(xù)大都不夠重視，個別嚴重的合同段還影響到計量支付工作的順利進行，增加了各方管理工作難度。

3 單價和包干混合式合同管理模式應(yīng)用成效

3.1 變更及變更引起的調(diào)價問題及合同爭議明顯減少 采用單價和包干混合式合同后，對大量包干項目來說，由于工程變更不涉及實際支付價款的變化，因而變更辦理的重點主要是方案論證和施工圖設(shè)計，對方案經(jīng)濟方面比較的要求較為粗曠，不容易出現(xiàn)爭議，這樣就大大提高了變更處理效率，有關(guān)人員可以把更多的時間和精力放在其他管理事務(wù)上。

3.2 促進提高勘察設(shè)計水平 采用單價和包干混合式合同的公路工程項目，業(yè)主要選派專人組成班子，重點對現(xiàn)場勘察工作進行跟蹤，力圖使這些方面的勘察更加細致和深入；要按照業(yè)主針對以往工程設(shè)計缺憾提出的補充要求和提示，額外增加了部分工作內(nèi)容，特別是對部分軟基進行逐處挖探摸查，對部分地質(zhì)復(fù)雜地段增加地質(zhì)鉆孔，對地形變化較大路段進行斷面加密測量，對圖紙工程量和招標工程量清單進行多次校核等。

3.3 促進施工企業(yè)改善現(xiàn)場組織與管理 絕大部分施工企業(yè)對單價和包干混合式合同條款予以了高度重視，主要體現(xiàn)在現(xiàn)場技術(shù)力量有所加強、更加注重現(xiàn)場組織管理的效率、更加重視成本管理以及優(yōu)化設(shè)計積極性有所提高等方面。在實行單價合同時曾經(jīng)發(fā)生的一些不良現(xiàn)象，如有些承包商不注意保護和及時支護隧道軟弱圍巖，個別承包商甚至通過制造塌方險情，以謀求工程變更追加工程量來獲取額外利潤等現(xiàn)象在四平―松原高速公路工程現(xiàn)場已經(jīng)基本杜絕。

3.4 減少變更及變更調(diào)價等問題的人為因素防范腐敗 采用單價和包干混合式合同顯著減少了該環(huán)節(jié)的人為因素，由于合同活口少，執(zhí)行起來透明度大為提高，許多問題連協(xié)商的余地都沒有，“找關(guān)系”、“托人情”、“走后門”的法子就更行不通了，對利益的追求只有通過在管理上找效益來實現(xiàn)。實行單價和包干混合式合同管理模式，只是力圖從某項制度的源頭上防范腐敗的一種嘗試，其最終效果如何，還有待時間的檢驗。

參考文獻

［1］張澤江,劉劍.總價包干施工總承包合同計量支付方式的探討［J］.山西建筑,2008,（09）.

［2］曹巍.論推行施工圖招標采用總價包干合同模式的現(xiàn)實意義［J］.建筑經(jīng)濟,2003,(01).

［3］唐小富.公路工程項目計量支付的管理［J］.公路與汽運,2004,(06)

篇4

各省、自治區(qū)、直轄市環(huán)境保護廳（局），新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團環(huán)境保護局，環(huán)境保護部各環(huán)境保護督查中心，中國石油和化學工業(yè)聯(lián)合會，中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會，各草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)：

為貫徹落實《國務(wù)院關(guān)于加強環(huán)境保護重點工作的意見》（國發(fā)〔2011〕35號）和《關(guān)于深入開展重點行業(yè)環(huán)保核查 進一步強化工業(yè)污染防治工作的通知》（環(huán)發(fā)〔2012〕32號），進一步提升我國草甘膦行業(yè)污染防治水平，我部決定開展草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)環(huán)保核查工作，并符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)名單公告，現(xiàn)將《草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)環(huán)保核查指南》（以下簡稱《指南》）印發(fā)給你們，請遵照執(zhí)行。

一、工作要求

（一）企業(yè)自愿申請環(huán)保核查

草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)環(huán)保核查以自愿為原則。企業(yè)可對照《指南》開展自查自糾，全面分析、查找存在的環(huán)保問題，盡快完成整改。經(jīng)過自查，符合要求的企業(yè)可以向所在地省級環(huán)保部門提交《草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)環(huán)保核查申請表》（附表1：詳見環(huán)保部網(wǎng)站）及相關(guān)證明材料。

（二）省級環(huán)保部門開展核查初審

各省級環(huán)保部門負責對轄區(qū)內(nèi)提交申請的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)進行初審。初審以日常環(huán)保監(jiān)管情況為基礎(chǔ)，結(jié)合企業(yè)申報材料，對照《指南》進行書面審查和現(xiàn)場檢查。對經(jīng)初審符合環(huán)保要求的企業(yè)，省級環(huán)保部門應(yīng)將初審意見及企業(yè)申請材料一并報送我部，同時抄送中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會。對初審中發(fā)現(xiàn)存在環(huán)境問題的企業(yè)，環(huán)保部門應(yīng)加強指導，督促整改；發(fā)現(xiàn)違法行為的應(yīng)依法予以處罰。

（三）環(huán)境保護部復(fù)核并公告

我部與中國石油和化學工業(yè)聯(lián)合會、中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會組織有關(guān)專家，對通過省級環(huán)保部門初審的企業(yè)進行復(fù)核，并組織各環(huán)境保護督查中心進行現(xiàn)場抽查。對符合環(huán)保法律法規(guī)要求、清潔生產(chǎn)水平較高的企業(yè)，向社會公示5個工作日，接受社會各界監(jiān)督。經(jīng)公示無異議的，我部公告符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)名單，并將名單抄送工業(yè)和信息化部、農(nóng)業(yè)部、商務(wù)部、質(zhì)檢總局等部門。

我部定期對通過環(huán)保核查的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)進行復(fù)查和抽查，如發(fā)現(xiàn)不符合本《指南》要求的，將撤銷其名單并予以公告。

二、時間安排

（一）2013年安排

草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)于7月30日前向所在地省級環(huán)保部門提交環(huán)保核查申請表和相關(guān)證明材料，各省級環(huán)保部門應(yīng)于9月30日前將通過初審企業(yè)名單及相關(guān)材料（附電子版）報送我部，我部將于12月底前公告符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)名單。

（二）2014-2015年安排

我部繼續(xù)開展草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)環(huán)保核查，企業(yè)應(yīng)于每年3月底前向省級環(huán)保部門提出核查申請，各省級環(huán)保部門應(yīng)于每年6月底前向我部報送通過初審企業(yè)名單，我部于每年9月底前符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)名單。到2015年底前，基本完成對草甘膦行業(yè)全面環(huán)保核查，公告3批符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)名單。

聯(lián)系人及聯(lián)系方式：

環(huán)境保護部污染防治司王曉密

電話：（010）66556298, 66556244（傳真）

郵箱：

地址：北京市西直門內(nèi)南小街115號

郵編：100035

中國農(nóng)藥工業(yè)協(xié)會曾途

電話：（010）84885918，84885001（傳真）

郵箱

地址：北京市朝陽區(qū)安慧里四區(qū)十六樓919房間

郵編：100723

環(huán)境保護部辦公廳

2013年5月21日

附件

草甘膦（雙甘膦）生產(chǎn)企業(yè)

環(huán)保核查指南

為貫徹落實科學發(fā)展觀，維護生態(tài)環(huán)境安全，保障人民群眾身體健康，提升草甘膦行業(yè)污染防治水平，指導草甘膦企業(yè)環(huán)境保護核查工作，制定本核查指南。

一、核查范圍

本指南適用于對草甘膦、雙甘膦原藥生產(chǎn)企業(yè)開展環(huán)保核查，符合環(huán)保要求的草甘膦（雙甘膦）原藥生產(chǎn)企業(yè)名單公告工作。

二、核查內(nèi)容

各省級環(huán)保部門應(yīng)根據(jù)日常環(huán)保監(jiān)管情況，對企業(yè)申請核查當年及上一年度環(huán)保法律法規(guī)執(zhí)行情況、環(huán)保治理設(shè)施完備性和運行效果進行現(xiàn)場核實：

（一）環(huán)保法律法規(guī)執(zhí)行情況

1.建設(shè)項目環(huán)境影響評價和“三同時”制度執(zhí)行情況。包括新、改、擴建項目是否依法履行環(huán)評審批及竣工環(huán)保驗收制度，環(huán)境影響評價文件批復(fù)和環(huán)保驗收意見中的要求是否逐一得到落實等。

2.污染物排放總量控制制度執(zhí)行情況。包括企業(yè)是否完成主要污染物總量減排任務(wù)，各項污染物排放是否滿足國家和地方污染物排放總量控制指標和排污許可證管理要求。

3.達標排放情況。包括環(huán)保治理工藝技術(shù)是否可行，環(huán)保設(shè)施是否齊全并與主體生產(chǎn)設(shè)施同步運行；企業(yè)是否執(zhí)行了環(huán)評報告或環(huán)保部門規(guī)定的監(jiān)測計劃；是否按有關(guān)要求安裝在線監(jiān)測裝置并與環(huán)保部門聯(lián)網(wǎng)；廢水、廢氣、噪聲等各項污染物是否達標排放；固體廢物是否規(guī)范收集、貯存（暫存）、轉(zhuǎn)移和綜合利用或無害化處置，委托處置危險廢物的，是否依法執(zhí)行危險廢物轉(zhuǎn)移聯(lián)單制度、是否交由有資質(zhì)單位利用和處置等。

4.排污申報登記、排污許可證和排污繳費制度執(zhí)行情況。包括是否進行排污申報登記；是否領(lǐng)取排污許可證，并達到排污許可證的要求（實行排污許可證制度的，由省級環(huán)保部門在初審意見中予以說明）；是否按規(guī)定足額繳納排污費。

5.實施清潔生產(chǎn)情況。是否依照《清潔生產(chǎn)促進法》開展清潔生產(chǎn)審核，并將審核結(jié)果向所在地縣級以上環(huán)保部門報告；是否通過評估驗收；是否依照《清潔生產(chǎn)促進法》和《環(huán)境信息公開辦法（試行）》及相關(guān)規(guī)定，披露企業(yè)基本信息、主要污染物排放情況、環(huán)保設(shè)施建設(shè)運行情況、環(huán)境污染事故應(yīng)急預(yù)案以及清潔生產(chǎn)審核結(jié)果等信息。

6.環(huán)境違法或重大突發(fā)環(huán)境事件情況。包括是否因環(huán)境問題被環(huán)保部門責令限期治理、限產(chǎn)限排或停產(chǎn)整治；是否受到環(huán)保部門處罰；是否發(fā)生重大及以上突發(fā)環(huán)境事件；是否存在對企業(yè)環(huán)境問題的投訴且尚未解決。

7.環(huán)境管理制度。包括企業(yè)是否有健全的環(huán)境管理機構(gòu)和環(huán)境管理制度；是否按規(guī)定制定環(huán)境風險應(yīng)急預(yù)案，應(yīng)急設(shè)施、物資是否齊備，是否定期培訓和演練等。

（二）企業(yè)環(huán)保工藝和設(shè)備

1.廢氣回收和治理設(shè)施：甘氨酸工藝草甘膦生產(chǎn)企業(yè)是否建有氯甲烷、甲醇、三乙胺、甲縮醛等回收利用裝置；IDA工藝草甘膦生產(chǎn)企業(yè)是否建有氨或氫回收利用裝置，含甲醛、氨、氯化氫等污染物尾氣是否建有相應(yīng)的廢氣處理設(shè)施、并做到達標排放等。

2.廢水治理設(shè)施：企業(yè)是否建有物化除磷、生化處理等廢水處理設(shè)施、并做到達標排放等。

3.母液回收處理裝置：企業(yè)是否建有和原藥生產(chǎn)能力相匹配的雙甘膦、草甘膦母液回收處理裝置（回收氯化鈉和磷資源）。

4.固體廢物貯存（暫存）場所和處理、處置設(shè)施：各類廢液、廢渣等固體廢物（包括草甘膦母液、廢水處理產(chǎn)生的含磷污泥、廢活性炭、農(nóng)藥包裝物等）是否按照環(huán)保標準規(guī)范貯存（暫存）；使用自有焚燒爐對產(chǎn)生的危險廢物進行焚燒處置的，是否符合《危險廢物焚燒污染控制標準》（GB18484-2001）；采取其他方式對危險廢物利用處置的，是否符合相關(guān)環(huán)保管理要求；母液是否違規(guī)被用于生產(chǎn)草甘膦水劑等。

篇5

    再保險(reinsurance)系保險人以其所承保的危險, 轉(zhuǎn)向他保險人為保險的契約行為,可謂為“保險之保險”(the insurance of insurance)。“其……對于再保險人而言,則有達成危險分散、節(jié)減營業(yè)費用與獲致優(yōu)厚利潤之效能;而對原被保險人,亦有加強安全保障、簡化投保手續(xù)及提高企業(yè)信用之功能。故曰保險經(jīng)營的成敗,端視再保險的運用妥當與否,實非虛言?！?注:袁宗尉:《再保險論》,臺灣三民書局1972年版,第12頁。)再保險合同及運用,均較一般保險合同更為精密、復(fù)雜且多變化,其影響之深遠足以左右保險事業(yè)的發(fā)展,然而在國內(nèi)并未受到應(yīng)有的重視。本文擬從再保險合同的概念出發(fā),討論再保險合同的性質(zhì),進而探討再保險合同的獨立性及從屬性,以期對再保險合同有進一步的認識。

    一、再保險合同的界定

    (一)再保險合同的性質(zhì)

    再保險合同雖種類繁多,方式互異,其本質(zhì)究竟是什么?似乎仍有探討的必要。關(guān)于再保險合同屬性的主要學說有:

    1.合伙合同或民法上其他有名合同

    有學者認為,再保險合同為原保險人與再保險人以分擔危險為共同目的之合伙合同。此說認為就其經(jīng)濟機能而言,原保險人與再保險人由于危險分擔之結(jié)果,在利害關(guān)系上有共同性,與合伙之性質(zhì)相似。易言之,再保險合同之當事人,就危險之分擔、利益之獲得而言,有其共同之目的,如此結(jié)合,無異合伙。再由再保險的種類觀察,不論比率再保險或溢額再保險,均由原保險人對原被保險人負給付之責,正如合伙債權(quán)人對合伙體請求履行合同之責。至于原保險人與再保險人責任的分攤,均由再保險合同決定,猶如合伙合同中約定出資額的多寡決定合伙人責任的大小。此說為德、日、法等國早期判例所采用。(注:袁宗尉:《保險法》,臺灣三民書局1969年版,第69頁。)筆者以為,就法律要件分析,合伙乃當事人互約共同出資以經(jīng)營共同事業(yè)之合同,亦即必須有共同之合伙財產(chǎn),當事人亦須以經(jīng)營共同事業(yè)之意思而訂立合同。而事實上原保險人與再保險人之間并無共同出資,且訂立再保險合同之目的亦非在經(jīng)營共同事業(yè),加之再保險人與原保險人系兩獨立的法人,各為合同之主體,并非兩者成為一合伙體,故再保險合同非合伙合同。早期代表性之見解還有保證理論、(注:此說認為,再保險合同的從屬性與保證契約從屬于債權(quán)契約而存在,兩者有相似之處,故認為再保險人類似于保證人之地位,若擔保保險人于事故發(fā)生時拒付保險金,將由再保險人代負履行之責。)轉(zhuǎn)讓理論(注:此說認為,原保險人將其對原被保險人之權(quán)利義務(wù)移轉(zhuǎn)給再保險人,亦即契約主體的變更。)及委任理論(注:此說認為,再保險人是受原保險人之委任,處理原保險人承擔危險等事物。)等,但由再保險的各種方式觀察前述理論,發(fā)現(xiàn)其均難以自圓其說。以比例再保險為例,原保險人將所承保之危險按一定比例分出給再保險人,由再保險人承擔一部分危險,這并不能使再保險人立于保證人的地位,進而代原保險人履行合同。而轉(zhuǎn)讓理論對比例再保險似可圓滿解釋,但對溢額再保險則無法自圓其說。另外,訂立再保險合同后,原保險人仍須處理理賠等工作,并非委由再保險人處理,故委任理論亦無法妥善解釋再保險合同的性質(zhì)。

    2.保險合同說

    由于再保險合同既非合伙亦非民法上其他有名合同,就應(yīng)從再保險人與原保險人間的合同內(nèi)容加以觀察。由此可以發(fā)現(xiàn),不論比例再保險或溢額再保險合同,均系由原保險人給付一定保險費,而由再保險人承擔危險的雙務(wù)合同。此合同的內(nèi)容與保險合同的內(nèi)容相一致,故再保險合同應(yīng)為保險合同無疑。唯其屬何種保險仍有以下爭議:

    (1)原保險合同說。亦即同種保險說、繼承說。此說認為, 再保險合同繼承原保險合同而來,兩者并無二致。因再保險之成立與否,僅視原保險是否存在,而其實質(zhì)內(nèi)容仍以原保險合同之內(nèi)容為基礎(chǔ),亦即認為再保險合同系由兩個團體承擔同一危險,而構(gòu)成同一利害共同體,再保險人賠償義務(wù)與原保險人賠償義務(wù)同時發(fā)生,再保險與原保險屬于同種保險。故原保險合同若為財產(chǎn)保險,則再保險合同為財產(chǎn)保險;原保險合同為人身保險者,再保險合同仍不失為人身保險。因為其保險標的并未改變。(注:陳繼堯:《再保險實務(wù)研究》,臺灣三民書局1976年版,第47頁。)

    (2)責任保險合同說。此說認為, 再保險系基于原保險合同中原保險人對原被保險人之給付責任,而以填補此種給付為目的之一種責任保險。因責任保險合同所保險之對象,并非被保險人于保險事故發(fā)生時所致之財產(chǎn)損失,而是避免其因法律或合同所負債務(wù)之增加或擴大,所保護者為消極之保險利益,亦即一種不利之關(guān)系。再保險合同對原保險人的保護,正是其依原保險合同所負之賠償責任,故其性質(zhì)應(yīng)為責任保險。換言之,不問原保險為財產(chǎn)保險或人身保險,再保險均屬責任保險。(注:[日]田邊康平:《保險契約法》,臺灣財團法人保險事業(yè)發(fā)展中心出版社1993年版,第116頁。)

    綜上所述,關(guān)于再保險合同,《中華人民共和國保險法》(以下簡稱《保險法》)僅有兩個條文的規(guī)定。其中第28條規(guī)定:“保險人將其承擔的保險業(yè)務(wù),以承保形式,部分轉(zhuǎn)移給其他保險人的,為再保險?！边@是我國法律對再保險合同概念的界定。筆者認為,我國法律雖然對再保險合同的性質(zhì)作出了明確規(guī)定,但上述法律條文所稱“將其所承擔的保險業(yè)務(wù)……轉(zhuǎn)移給其他保險人”至少有以下兩層含義:其一,不論原保險合同為壽險或非壽險,再保險均系基于有效合同基礎(chǔ)之上而成立的保險合同;其二,再保險之特征為責任轉(zhuǎn)嫁或分擔。據(jù)此,筆者認為,我國法律雖然沒有明文規(guī)定再保險合同為責任保險,但從國家立法宗旨和當事人締約目的觀察,此種合同在性質(zhì)上當屬責任保險合同無疑。

    (二)再保險與相似制度的比較

    為了更進一步明確再保險合同的特征,有必要比較與再保險相類似的制度——共同保險與重復(fù)保險之間的差異。

    1.再保險與共同保險。共同保險(co-insurance)是由兩個或兩個以上的保險人聯(lián)合直接承保同一保險標的、同一保險利益、同一保險責任而總保險金額不超過保險標的可保價值的保險。共同保險的各保險人在各自承保金額限度內(nèi)對被保險人負賠償責任。再保險與共同保險均具有擴大風險分散范圍、平均風險責任、穩(wěn)定保險經(jīng)營的功效。兩者的區(qū)別在于:共同保險是多數(shù)保險人同投保人建立的保險關(guān)系,屬橫向聯(lián)系和原保險,且為原保險的特殊形式;就風險的分散方式而言,它是風險的第一次分散,因此,各共同保險人仍然可以實施再保險。而再保險是保險人同保險人建立的保險關(guān)系,是縱向聯(lián)系;就風險的分散方式而言,再保險是在原保險基礎(chǔ)上進一步分散風險,是風險的第二次分散,并可通過轉(zhuǎn)分保使風險更加細化。從歷史沿革來看,共同保險的產(chǎn)生早于再保險。但由于再保險的融通性高且運用方便,現(xiàn)代保險實務(wù)中普遍采用再保險分散風險的方式。而最近的發(fā)展結(jié)果表明,共同保險與再保險并非背道而馳,反而漸趨接近,呈出現(xiàn)共同保險的再保險化與再保險的共同保險化之“互化”趨勢。盡管如此,兩種制度間的差異仍較明顯。

    2.再保險與重復(fù)保險。重復(fù)保險是指投保人對同一保險標的、同一保險利益、同一保險事故分別向兩個以上保險人訂立保險合同的保險。重復(fù)保險雖與再保險一樣具有分散風險的功能,但二者之間的差異是明顯的:從締約動機上看,重復(fù)保險的投保人若系善意,旨在增強安全保障,惡意投保人則往往在于圖謀不當?shù)美?而再保險乃原保險人為避免或減輕所負責任,所做出分散危險的制度安排。從告知義務(wù)的履行事項看,重復(fù)保險的投保人應(yīng)當將重復(fù)保險的有關(guān)情況通知各保險人;而再保險分出人(原保險人)則應(yīng)將其自負責任及原保險的有關(guān)情況告知再保險接受人。從超額部分保險的效果來看,重復(fù)保險中保險金額不得超過保險價值,超過保險價值的,超過的部分無效;而再保險中則可就超額約定再保險合同。總之,再保險與重復(fù)保險為兩種不同的保險制度。

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[關(guān)鍵詞] 肝細胞癌；肝切除術(shù)；肝血流阻斷；肝硬化

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）07（c）-0041-04

手術(shù)治療一直是原發(fā)性肝癌的首選治療方法，但是肝臟血供十分豐富，如何選擇有效的減少肝臟手術(shù)中出血量和避免各種并發(fā)癥的發(fā)生，不但關(guān)系著手術(shù)成功率，還影響著患者的預(yù)后。目前，臨床上主要采用半肝血流阻斷法和全肝入肝血流阻斷法（Pringle法）。本研究比較了這兩種肝血流阻斷法在肝細胞癌合并肝硬化手術(shù)患者療效和安全性，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2013年9月于廣東省高州市人民醫(yī)院行肝切除術(shù)的肝細胞癌患者80例，年齡35～86歲，平均（37.4±8.3）歲。所有患者術(shù)后病理證實均為肝細胞肝癌合并肝硬化。根據(jù)入肝血流阻斷方法的不同將其分為對照組）（Pringle法）和觀察組（半肝入肝血流阻斷法），每組各40例。其中9例患者入院化驗肝功能Child B級，給予甘利欣、谷胱甘肽等保肝治療后，術(shù)前復(fù)查肝功能達到Child A級，患者腫瘤切除范圍均不超過半葉肝。兩組患者性別、年齡、腫瘤大小、Child分級一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性。見表1。

1.2 手術(shù)方法

1.2.1 半肝入肝血流阻斷法 常規(guī)開腹手術(shù)必須先明確是否存在手術(shù)禁忌證。首先充分游離肝臟，顯露出十二指腸韌帶，用組織剪由十二指腸韌帶一側(cè)分離肝固有動脈，繼而顯露肝左右動脈，并使用血管夾夾閉患側(cè)半肝動脈。把一根乳膠管連接于肝固有動脈深面和肝十二指腸韌帶，切除肝臟腫瘤細胞時一起截斷門靜脈、膽總管和患側(cè)半肝動脈，并保證健側(cè)血流的供應(yīng)。手術(shù)由經(jīng)驗豐富的主治醫(yī)師實施，止血常規(guī)采用電凝法、血管結(jié)扎等手段，切肝后檢查有無活動后出血后開放入肝血流以保證手術(shù)的成功。

1.2.2 Pringle法 肝血流阻斷探查、肝切除及斷面止血方法同1.2.1。肝臟游離后經(jīng)文氏孔繞過肝十二指腸韌帶乳膠管，用乳膠管扎緊肝十二指腸的韌帶，以阻斷全肝血供。一般阻斷的時間控制在20 min以內(nèi)，開放時間5～15 min，最多阻斷2次。

1.3 觀察指標

分別記錄兩組患者手術(shù)所需時間、術(shù)中失血量、術(shù)后第3、7天的血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、（ALB）、總膽紅素（TBIL）、凝血酶原時間（PT）水平等肝功能指標，并比較其術(shù)后安全性。

1.4 生活質(zhì)量評估表

采用國內(nèi)1990年制訂的腫瘤患者生活質(zhì)量評分試行草案，采用1～5級評分，1分為最差，5分為最好，得分越高生活質(zhì)量越高。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組術(shù)中情況

兩組患者在術(shù)中失血量、肝門阻斷總時間、手術(shù)時間及術(shù)后住院時間上差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表2。

2.2 兩組肝功能指標比較

對照組和觀察組術(shù)前血清ALT、TBIL、AST、ALB及PT比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），術(shù)后第3、7天，觀察組血清ALT、TBIL、AST、ALB及PT均顯著低于，對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。見表3。

2.3 兩組術(shù)后并發(fā)癥及不良反應(yīng)發(fā)生情況比較

兩組患者均未出現(xiàn)大出血、感染性休克、肝衰竭。對照組術(shù)后發(fā)生肺部感染4例，膽瘺2例，腹腔積液12例。觀察組術(shù)后發(fā)生肺部感染9例，膽瘺4例，腹腔積液4例。對照組術(shù)后腹腔積液發(fā)生率明顯低于觀察組（P < 0.05）。見表4。

2.3 兩組手術(shù)前后生活質(zhì)量評分

手術(shù)后觀察組的總生存質(zhì)量、食欲、睡眠、自理能力、心理能力、對疾病的認識評分明顯高于對照組，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01）。見表5。

3 討論

眾所周知，我國是一個肝炎大國，而大約有80%的肝炎患者為肝硬化患者。目前，一般通過各種肝血流阻斷術(shù)來減少肝切除術(shù)術(shù)中的出血量，但截斷入肝血流也會相應(yīng)地造成肝功能不能及時恢復(fù)[1]。Pringle法和半肝入肝血流阻斷法是肝膽外科常見的血流阻斷技術(shù)。Pringle法主要通過完全阻斷肝動脈和門靜脈的入肝血流[2-3]，這也就是阻斷了幾乎所有的入肝血流，會造成整個肝臟功能的失代償，特別是那些合并肝硬化的患者，嚴重者可能會發(fā)生肝衰竭導致死亡。臨床上，雖然采用阻斷的時間控制在20 min以內(nèi)，開放的時間在5～15 min，至多阻斷2次。盡管間歇地阻斷入肝血流在一定程度可以改善肝臟的缺血缺氧而影響其正常功能的運行，但在開放的5～15 min會使較多的創(chuàng)面出血，造成大量失血，也會造成手術(shù)時間的增加。Pringle法簡便易行，是一種比較有效的血流阻斷方法，無需過多解剖肝門，操作簡單、省時，緊急情況下可快速達到止血的目的，適合各級醫(yī)院開展，但不適合于腫瘤已侵犯肝門或腔靜脈的手術(shù)[4]。有文獻指出，常規(guī)手術(shù)下切斷狗的肝動脈和門靜脈，20 min后會引起其上消化道大出血而死亡[5-7]。其原因可能是切斷入肝血流會引起相關(guān)的病理生理現(xiàn)象，血流的阻斷導致肝細胞影響其結(jié)構(gòu)和功能，而合并肝硬化的患者對肝臟功能的影響尤為顯著。

半肝入肝血流阻斷法主要是選擇性阻斷患側(cè)的半肝入肝血流，保留對側(cè)半肝的正常入肝血流，阻斷后可在半肝分界面上出現(xiàn)清晰的分界線[8]。其優(yōu)點為：為進行更為精細的手術(shù)操作贏取了時間；因為只阻斷患側(cè)肝入肝血流在一定程度減輕了缺血-再灌注損傷；術(shù)后并發(fā)癥較少、肝功能較易恢復(fù)，特別適用于合并有肝硬化肝癌患者的肝葉切除[9-11]。Chau等[12]指出，合并肝功能不全的患者行肝臟切除術(shù)，兩種方法在減少出血方面同樣安全、有效，但半肝阻斷術(shù)后患者早期肝功能較Pringle法恢復(fù)更快，尤其是對入肝血流阻斷時間大于45 min的患者，術(shù)后恢復(fù)更具優(yōu)勢。還有報道肝癌患者對照研究結(jié)果提示半肝阻斷明顯優(yōu)于Pringle法，前者術(shù)后肝功能恢復(fù)快，并發(fā)癥少[13-16]。

本研究發(fā)現(xiàn)，兩組患者手術(shù)時間和術(shù)中出血量相比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），但術(shù)后觀察組第3、7天的血清ALT、TBIL水平明顯低于對照組（P < 0.01）。觀察組術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率明顯低于對照組（P < 0.05）。這些提示半肝入肝血流阻斷法與Pringle法相比，不但減輕了肝臟缺血再灌注損傷的程度，還加快了術(shù)后肝功能的恢復(fù)。故在今后的手術(shù)中，對于原發(fā)性肝癌合并肝硬化的患者，都可以采取半肝入肝血流阻斷法進行肝臟手術(shù)，會在一定程度上改善患者預(yù)后的速度。此外，觀察組術(shù)后生活質(zhì)量評分明顯高于對照組（P < 0.05）。這提示與Pringle法相比，半肝入肝血流阻斷法在一定程度上增強了患者手術(shù)后心理、生理的恢復(fù)，能更好地提高患者的生活質(zhì)量。

綜上所述，半肝入肝血流阻斷法手術(shù)解剖分離等操作簡單、安全且療效顯著，并能有效控制術(shù)中出血量和減少術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，術(shù)后的肝功恢復(fù)較快，值得在臨床上大力推廣。

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改善中小企業(yè)融資老大難問題到底路在何方？近日，寶瑞通典當行用一場黃金盛宴交出了答卷。

1月10日，寶瑞通典當行在西壩河總店開啟了以“寶瑞通賀歲感恩，四重豪禮大回饋”為主題的黃金特惠活動?；顒又校瑢毴鹜ㄎ鲏魏拥暌?38元/克的國際金價回饋老客戶，同時在所有分店推出了黃金典當息費低至6折和黃金典當價格提高等一系列黃金典當優(yōu)惠舉措，滿足年末廣大客戶典當融資的需求。

除了黃金銷售之外，寶瑞通此次重點推出黃金典當業(yè)務(wù)升級舉措，在之前的優(yōu)惠基礎(chǔ)上又加大了對小微企業(yè)的扶持力度。黃金典當息費6折起，老客戶息費低至2.9%；同時黃金典當價格也有所提高，黃金保真的情況下，典當價格最高可達到黃金交易所報價的90%以上，這些優(yōu)惠措施對于年前著急籌措資金的中小企業(yè)主們來說，在短時間內(nèi)付出更低的利息卻能獲得更多的資金，是個難得的機會。

“本次活動將息費降低了30%～40%，這也是2014年我們回饋廣大中小企業(yè)的第一重豪禮，保守估計，僅這一項業(yè)務(wù)我們一年就將讓利近千萬元。”寶瑞通典當行民品經(jīng)營中心總經(jīng)理王德強告訴記者。目前，寶瑞通典當業(yè)務(wù)中接待的客戶尤其是老客戶里有將近7成是小微企業(yè)。由于企業(yè)規(guī)模等特點，選擇黃金等貴金屬典當融資成為小微企業(yè)快速解決資金困難的常用手段之一。寶瑞通這次感恩回饋，除了賀歲酬賓讓利消費淘寶的老百姓之外，最主要的目的就是希望通過讓利扶持小微企業(yè)，使他們付出更小的代價、快速融到更多資金。

小微企業(yè)是中國經(jīng)濟的基本細胞，占到所有企業(yè)的90%以上，他們具有數(shù)量大、類型多、靈活性強等特點，在促進增長、增加就業(yè)等方面具有不可替代的作用?！霸谒麄兊慕?jīng)營過程中，因發(fā)放工資、進貨采購等各種原因，經(jīng)常出現(xiàn)短期的資金缺口，融資需求旺盛。但因企業(yè)規(guī)模資質(zhì)有限、難以符合銀行苛刻的審核條件等局限，融資貸款難是老大難問題。這種情況下，典當行則因為放款便捷、安全穩(wěn)妥的優(yōu)勢成為他們的首選。所以，我們一直通過拓寬渠道、創(chuàng)新形式、升級業(yè)務(wù)等方式不斷滿足其發(fā)展的需要，一方面通過讓利拓寬業(yè)務(wù)渠道和中小企業(yè)共同成長，另一方面也希望困擾小微企業(yè)的融資難問題能得到一些緩解?！?寶瑞通典當行王德強向記者介紹。

篇8

考古發(fā)掘現(xiàn)場（以下簡稱發(fā)掘現(xiàn)場）動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)由發(fā)掘現(xiàn)場動態(tài)環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)和發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺兩部分組成。

發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺的作用是為發(fā)掘現(xiàn)場監(jiān)測子系統(tǒng)提供實時的數(shù)據(jù)支持，由發(fā)掘現(xiàn)場硬件平臺和發(fā)掘現(xiàn)場軟件平臺兩個部分組成。發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測硬件平臺由傳感器節(jié)點、中繼節(jié)點和網(wǎng)關(guān)三個部分組成：布置在現(xiàn)場的數(shù)據(jù)采集節(jié)點負責采集實時環(huán)境數(shù)據(jù)（如大氣溫濕度、光照強度、降塵和有害氣體等），按照一定的路由規(guī)則將數(shù)據(jù)發(fā)送至通信范圍內(nèi)的父節(jié)點，然后通過中繼節(jié)點的相互中繼，將數(shù)據(jù)不斷轉(zhuǎn)發(fā)直至到達網(wǎng)關(guān)節(jié)點。網(wǎng)關(guān)節(jié)點通過遠程通信方式，如衛(wèi)星通信、Internet、GPRS等手段，將數(shù)據(jù)傳送至遠程客戶終端。其中各個數(shù)據(jù)采集節(jié)點和中繼節(jié)點根據(jù)RSSI（接收信號強度指示）和跳數(shù)來選擇合適的中繼節(jié)點作為父節(jié)點，并以此在數(shù)據(jù)采集節(jié)點和中繼節(jié)點間建立簇內(nèi)星狀網(wǎng)絡(luò)拓撲結(jié)構(gòu)，中繼節(jié)點之間則根據(jù)RSSI值建立樹狀網(wǎng)絡(luò)拓撲結(jié)構(gòu)。每個傳感器節(jié)點和中繼節(jié)點在上電后自動加入網(wǎng)絡(luò)，并定期將采集到的數(shù)據(jù)沿最優(yōu)路由方向傳送至網(wǎng)關(guān)。發(fā)掘現(xiàn)場實時監(jiān)測軟件平臺則由中間件、數(shù)據(jù)庫和數(shù)據(jù)采集接口三個部分組成。數(shù)據(jù)采集接口將接收到的實時監(jiān)測數(shù)據(jù)存入數(shù)據(jù)庫中，中間件的作用則是將數(shù)據(jù)庫中保存的監(jiān)測數(shù)據(jù)取出，并提供給用戶和子系統(tǒng)。

發(fā)掘現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)由于監(jiān)測系統(tǒng)需要對發(fā)掘現(xiàn)場的內(nèi)外環(huán)境同時進行監(jiān)測，因此發(fā)掘現(xiàn)場監(jiān)測子系統(tǒng)由環(huán)境監(jiān)測子系統(tǒng)和氣象監(jiān)測子系統(tǒng)組成。環(huán)境系統(tǒng)檢測子系統(tǒng)主要是針對文物所處環(huán)境參數(shù)，如大氣溫度、大氣相對濕度、土壤溫度、土壤水分含量、文物表面溫度、文物表面濕度、大氣二氧化碳濃度、有機揮發(fā)物總量等參數(shù)進行監(jiān)測。氣象監(jiān)測子系統(tǒng)主要是針對發(fā)掘現(xiàn)場所處小環(huán)境的氣象參數(shù)，如光照度、紫外線強度、風速、風向、降雨量等參數(shù)的實時監(jiān)測。監(jiān)測系統(tǒng)的目的在于對文物所處環(huán)境的各種參數(shù)進行數(shù)據(jù)挖掘整理，精確掌握文物埋藏的環(huán)境參數(shù)，實現(xiàn)對出土文物在第一時間的檢測分析以及文物出土環(huán)境參數(shù)的采集，建立環(huán)境參數(shù)歷史數(shù)據(jù)庫，為文物預(yù)防性保護提供技術(shù)支撐，并為文物保護措施的制訂提供科學依據(jù)。

案例研究

鳳棲原文物保存環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)分析鳳棲原張安世墓葬遺址屬于西漢宣帝時期的重臣、被封富平侯的大司馬將軍張安世。張安世在西漢的地位舉足輕重，其墓葬的出土文物進一步證實了這一點，出土的很多隨葬品都屬于西漢皇帝御賜物件。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場實際狀況及需要，目前已部署七個監(jiān)測點，監(jiān)測時段大約在八個月左右，監(jiān)測點部署圖如下（圖4）。數(shù)據(jù)記錄及分析3月份期間，鳳棲原張安世墓葬遺址氣象站監(jiān)測數(shù)據(jù)存在較大波動（圖5）。其中3月19日-3月21日期間，環(huán)境溫度基本保持在4℃左右，環(huán)境濕度基本保持在100%，波動均不大，光照變化范圍也縮減至0-2000lx之間。結(jié)合當時的天氣變化，3月天氣剛剛由寒轉(zhuǎn)暖，氣候變化較頻繁，3月19日-3月21日是降雨天氣，持續(xù)陰天，光照度較低，導致空氣中水分蒸發(fā)較少。3月22日停止降水后，光照開始恢復(fù)，環(huán)境濕度逐漸下降，氣溫也逐漸回升（因水分揮發(fā)緩慢，恢復(fù)的較為遲緩）?？傮w來看，3月份氣象站的大氣溫度變化為0℃到23℃之間，大氣濕度在16%到75%之間，每天的照度變化最大范圍0lx到8500lx內(nèi)，氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致，溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢。環(huán)境變化正常，期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的。查看這一段時間82號監(jiān)測點的土壤溫度和含水量的變化，遺址坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動較大（圖6），其中3月19日-3月21日土壤水分含量逐漸升高（由4.34%上升至4.65%），土壤溫度也隨之逐漸降低（由10.5℃下降至5℃）。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，3月天氣變化頻繁，3月19日-3月21日為降雨天氣，室內(nèi)土壤雖然不直接受到降雨給監(jiān)測數(shù)據(jù)帶來的驟然變化，但由于受到外界土壤水分的滲透作用，土壤溫度和水分含量也隨之以相同的趨勢逐漸變化。3月22日停止降水后，土壤水分含量逐漸下降，土壤溫度也逐漸回升?？傮w來看，土壤溫度在5.2℃到13℃范圍之間、土壤含水在4.3%到4.65%范圍之間保持著較為穩(wěn)定的變化，并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化）。查看這一段時間90號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化，3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大（圖7）。其中3月19日-3月21日，大氣溫度由10℃驟降至1℃，大氣濕度由41%驟升至98%，變圖4監(jiān)測點部署圖化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，3月19日-3月21日為降雨天氣，大氣溫濕度受到直接影響帶來的突然變化。3月22日停止降水后，大氣溫度逐漸回升，大氣濕度也逐漸回落，監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化?？傮w來看，大氣環(huán)境溫度在1℃到22℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化，并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化）。查看這一段時間92號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化，3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大（圖8）。其中3月19日-3月21日，大氣溫度由10℃驟降至0℃，大氣濕度由50%驟升至100%，變化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，3月19日-3月21日為降雨天氣，大氣溫濕度受到直接影響導致突然變化。3月22日停止降水后，大氣溫度逐漸回升，大氣濕度也逐漸回落，監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化?？傮w來看，大氣環(huán)境溫度在0℃到22.5℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-100%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化，并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化）?？偨Y(jié)對比4個監(jiān)測點的數(shù)據(jù)變化，監(jiān)測點的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致，并且與當時的天氣環(huán)境較一致，說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。

高陵張棟家族墓文物保存環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)分析2011年陜西考古研究院專家在高陵縣涇河工業(yè)園發(fā)現(xiàn)一處罕見的完整明代家族墓園。據(jù)墓志記載，墓主人張棟生前為秦藩王府知印。這一發(fā)現(xiàn)對研究明代墓葬制度、風俗文化具有重要作用。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場實際狀況及需要，目前已部署十一個監(jiān)測點，監(jiān)測點部署圖如下（圖9）。說明：100號監(jiān)測點:自動氣象站--監(jiān)測外界環(huán)境。52、53、54、55號監(jiān)測點：大氣溫濕度傳感器--其中53號監(jiān)測點監(jiān)測墓室底部到地表中間部位的環(huán)境，其他監(jiān)測點監(jiān)測墓室中的環(huán)境。61、62、63、64、65號監(jiān)測點：土壤溫度、土壤水分含量傳感器--其中65號監(jiān)測點監(jiān)測墓室底部到地表中間部位的環(huán)境，其他監(jiān)測點監(jiān)測墓室中的環(huán)境。71號監(jiān)測點：二氧化碳傳感器--監(jiān)測墓室中二氧化碳含量。數(shù)據(jù)記錄及圖形分析查看這一段時間52號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化，5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大（圖10）。其中5月1日-5月3日期間，濕度維持在82%-93%之間，溫度在17.5℃-22.5℃之間，基本保持在高濕、低溫的水平，晝夜溫差和濕度差較小；5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變，濕度由62%升至88%，溫度由25℃降至最低17℃。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，5月為春季末尾，氣溫總體呈緩慢上升趨勢，并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣，濕度很大，氣溫較低。無降水期間，光照逐漸充裕，環(huán)境濕度逐漸下降，氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢。總體來看，當月大氣環(huán)境溫度在16℃到35℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%到98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化，并且二者保持相符的變化趨勢。監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)進行對比）。查看這一段時間71號監(jiān)測點的二氧化碳含量變化，5月期間遺址環(huán)境的二氧化碳含量波動較大（圖11）。以5月9日為分界，5月1-9日二氧化碳含量在200-450ppm之間波動較大且均值偏高，5月9-20日二氧化碳含量在200-330ppm之間波動較小且均值偏低。經(jīng)調(diào)查，5月1-9日，71號監(jiān)測點放置于M4考古發(fā)掘現(xiàn)場，現(xiàn)場白天有大量工作人員活動，白天由人體排放的二氧化碳使得空氣中二氧化碳濃度較高，夜晚則恢復(fù)至正常水平；5月9日之后，為防止因挖掘工作破壞監(jiān)測設(shè)備，工作人員將其挪至無人活動的M5內(nèi)，并以不透氣薄膜覆蓋，給71號監(jiān)測設(shè)備營造出密閉的微環(huán)境，故而二氧化碳含量偏低且波動較小。其中5月1日-5月3日期間，二氧化碳含量在300-430ppm之間變化幅度相對較小，基本保持在高濕、低溫、高濃度二氧化碳的水平。經(jīng)分析，因期間有降雨，空氣流通不暢，故而空氣中二氧化碳含量一直保持在較高水平且波動較小。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化，并且三者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化進行對比）。查看這一段時間53號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化，5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大（圖12）。其中5月1日-5月3日期間，濕度維持在60%-100%之間，溫度在16-28℃之間，基本保持在高濕、低溫的水平，晝夜溫差和濕度差相對較??；5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變，濕度由62%升至100%，溫度由25℃降至最低17℃，之后的3天內(nèi)，濕度的最高值均能達到100%。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看，5月為春季末尾，氣溫總體呈緩慢上升趨勢，并伴隨偶爾降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣，濕度很大，氣溫較低。無降水期間，氣溫呈緩慢上升趨勢。結(jié)合監(jiān)測點的布設(shè)位置（53號節(jié)點布設(shè)在墓底部和地表中間位置），且通風不暢導致濕度在降雨之后的3天內(nèi)并沒有立即回落，而是逐漸降低且較其他監(jiān)測點數(shù)據(jù)高。總體來看，監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化，環(huán)境變化正常。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化）。查看這一段時間65號監(jiān)測點的土壤溫度和含水量的變化，坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動較大（圖13），5月1-11日土壤水分含量保持在20-43%之間，土壤溫度變化范圍維持在18-21℃之間；5月12日土壤水分含量由15%突升至42%，土壤溫度峰值也由29℃大幅降至23.5℃，之后逐漸恢復(fù)至平均水平。經(jīng)調(diào)查，5月1-11日監(jiān)測設(shè)備放置于墓室內(nèi)，故而受外界降雨等影響較小且緩慢，5月12日之后設(shè)備被挪至墓室外環(huán)境，由于當日有降雨，室外濕度較大，所以監(jiān)測數(shù)據(jù)突增。總體來看，土壤溫度在19.5℃到29.5℃之間、土壤含水率在15%到43%之間保持著較為穩(wěn)定的變化，并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的（可查看氣象站數(shù)據(jù)變化）。5月份期間，高陵張棟家族墓遺址內(nèi)氣象站監(jiān)測數(shù)據(jù)存在較大波動（圖14）。其中5月1日-5月3日期間，濕度維持在82-100%之間，溫度在15-23℃之間，照度在0-5000lx之間，基本保持在高濕、低溫、弱光照的水平，晝夜溫差和濕度差較小；5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變，濕度由60%升至100%，溫度由22℃降至最低12℃，光照度變化范圍也縮減至0-4200lx。結(jié)合當時的天氣變化，5月為春季末尾，氣溫總體呈緩慢上升趨勢，并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣，持續(xù)陰天，光照度較低，氣溫降低。無降水期間，光照逐漸充裕，環(huán)境濕度逐漸下降，氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢?？傮w來看，氣象站的大氣溫度在12-32.5℃之間，大氣濕度在18%-100%之間，照度變化最大范圍為0-9000lx，氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致，溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢。環(huán)境變化正常，期間出現(xiàn)的特殊變化，多是天氣變化引起的。總結(jié)對比4個監(jiān)測點的數(shù)據(jù)變化，監(jiān)測點的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致，并且與當時的氣候環(huán)境較一致，說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。

結(jié)語

篇9

【關(guān)鍵詞】CRP;白細胞計數(shù);感染性疾病

【中圖分類號】R446.1【文獻標識碼】B【文章編號】1008-6455（2011）08-0157-01

CRP是在活化的巨噬細胞分泌的細胞因子刺激下，誘導肝細胞產(chǎn)生的一種急性非特異性反應(yīng)蛋白。正常人血液含量很少，在急性期炎癥反應(yīng)時，肝細胞可大量合成CRP，其濃度顯著增高，它是急性反應(yīng)極靈敏的指標[1]。CRP目前已經(jīng)作為醫(yī)院常規(guī)檢測項目，可以在很多疾病診斷上作為輔助診斷依據(jù)。本文對我院兒科門診500例感染性疾病患兒進行了CRP與白細胞計數(shù)的聯(lián)合檢測.并對結(jié)果進行了統(tǒng)計分析?，F(xiàn)報道如下：

1 材料和方法

1.1 資料：2011年1月到5月我院兒科患兒，年齡在1到10歲。

1.2 方法：CRP采用OrionDiagnospica檢測儀免疫比濁法，檢測原理：可溶性抗原（CRP）能與特異性抗體（CRP抗血清）反應(yīng).生成不溶性的抗原一抗體復(fù)合物，當光線通過反應(yīng)懸液時，發(fā)生散射并由特定的蛋白分析儀檢測到。散射光值的高低與測試樣品中的CRP成比例。白細胞計數(shù)由SYSMEXXT-2000i五分類血球計數(shù)儀檢測血常規(guī)，試劑為儀器廠家專用配套試劑，同時加入質(zhì)控樣本，符合要求后再行測定。

1.3 標本采集標本：采集嚴格消毒，采集毛細血管血80ul，注入盛有EDTA-K2抗凝管內(nèi)混勻，按照各自的規(guī)程嚴格操作，分別測定白細胞和CRP。

1.4 結(jié)果：判斷CRP>8mmol／L，白細胞>10×109／L為陽性。

2 結(jié)果

500例患兒中CRP與白細胞同時升高者348例，陽性率69.6%，CRP與白細胞均在正常范圍內(nèi)者27例，占5.4%。見表1

表1 500例感染性疾病患兒CRP與白細胞計數(shù)的關(guān)系分析

3 討論

CRP被公認是一項最敏感的炎癥指標，CRP在大多數(shù)病毒感染時血清濃度輕度升高或不升高，在直接創(chuàng)傷和大多數(shù)細菌感染時明顯升高。近年來，國內(nèi)外諸多文獻報道CRP可鑒別細菌與病毒感染并指導抗生素使。CRP不受性別、年齡，貧血、高球蛋白血癥、抗生素、免疫抑制劑和激素等因素的影響，因而它優(yōu)于其他急性期的反應(yīng)物質(zhì).故CRP測定可作為細菌與病毒感染鑒別診斷的敏感指標[2]。CRP明顯高于參考值時，臨床可基本確定有細菌感染的存在，且與感染呈正相關(guān)。在炎癥時，CRP于4～6小時內(nèi)迅速合成，36～50小時達高峰，峰值可為正常值的100～1000倍。經(jīng)積極、合理地治療后，3～7天降至正常。CRP的高低變化與炎癥反應(yīng)的嚴重程度及病情發(fā)展有重要相關(guān)性。在細菌感染時常導致CRP水平升高，而CRP在大多數(shù)病毒感染情況下濃度變化不大或基本保持不變，這是由于大多數(shù)病毒感染是在機體細胞內(nèi)進行的，而完整的機體細胞膜上缺乏暴露的磷脂蛋白質(zhì)，所以不能觸發(fā)CRP產(chǎn)生和結(jié)合。不同的是，多數(shù)細菌感染發(fā)生在細胞外，細菌直接創(chuàng)傷使兩邊的細胞膜分離，暴露出膽堿磷酸分子和提供一個CRP的附著點，通過IL-6和其他白細胞介素將信息傳遞給肝臟，刺激肝細胞產(chǎn)生有活性的CRP。這就是CRP用于鑒定細菌感染和病毒感染的基礎(chǔ)。CRP的檢測具有操作簡便、快速、標本量少的特點，可以輔助醫(yī)生進行細菌與非細菌性感染的鑒別。CRP與血常規(guī)聯(lián)合檢驗還可以較好地指導臨床用藥，抗生素的濫用所導致的不良后果.不良反應(yīng)以及耐藥菌株的不斷增多，已引起兒科醫(yī)生和患兒家長的廣泛關(guān)注，兒科醫(yī)生對CRP與WBC計數(shù)同時增高的患兒，可選用抗生素治療，對CRP與WBC均在正常范圍內(nèi)可以不使用抗生素，以減少抗生素的濫用，或視臨床表現(xiàn)給予適當處理，對CRP與WBC計數(shù)變化不一致的最好作隨診觀察[3-5]。

白細胞計數(shù)是對炎癥疾病輔助診斷的傳統(tǒng)指標，大部分化膿性細菌引起的炎癥、組織損傷、手術(shù)創(chuàng)傷等均可引起白細胞的增高。但白細胞計數(shù)的影響因素較多，存在生理波動，如妊娠晚期、月經(jīng)期、餐后、劇烈運動后、冷水浴后、情緒激動和疼痛等都可以引起白細胞計數(shù)的生理性增高。有關(guān)報道也表明，由于一些白細胞基數(shù)低的患兒，WBC輕度升高不會超過正常范圍，在日常檢驗工作中，我們也發(fā)現(xiàn)不少白細胞計數(shù)正常但CRP增高的病例,所以單獨對白細胞計數(shù)進行分析是片面的，不能準確反映患者的病情,故應(yīng)用白細胞計數(shù)和CRP的聯(lián)合檢測可以彌補不足。

兒童全血CRP檢測應(yīng)用免疫比濁法進行測定，標本用量少，操作簡單、結(jié)果準確，實驗快速,5分鐘內(nèi)可得出結(jié)果。結(jié)合白細胞計數(shù)，可以很好地鑒別細菌感染和病毒感染,在臨床上有效減少了抗生素的濫用。

綜上所述，在兒童感染性疾病中，全血CRP可明確鑒別細菌和病毒感染。將全血CRP和白細胞計數(shù)二者聯(lián)合檢測,在兒童感染性疾病的診斷中有重要意義。

參考文獻

[1] 周新，阮小明.臨床檢驗診斷學考核指南［M］.武漢：湖北科學技術(shù)出版社，2006:122

[2] 陳志云.C-反應(yīng)蛋白與疾病的關(guān)系及意義［J］.河北醫(yī)學,2007,13（8）:990-992

[3] 孫俠.快速CRP檢測在兒科急性感染性疾病中的診斷價值.北京醫(yī)學，2008年第30卷第4期238

篇10

[關(guān)鍵詞] Rab27A；Rab27B；肝細胞癌；RT-PCR；Western blot

[中圖分類號] R735 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）06（a）-0004-04

Expression of Rab27A and Rab27B in the four different hepatocellular carcinoma

LIU Ding LIU Jian-sheng

The First Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of Rab27A and Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line and its effect on biology characteristics of the cells. Methods The mRNA expression of Rab27A and Rab27B was detected by RT-PCR，and Western-blot in 3 human HCC lines of HepG2，Huh-7，Li-7 and the immortalized hepatic cell line of HL-7702. Results Rab27A and Rab27B were differentially expressed in cell lines and primary HCC tumors.The expression of Rab27A in 3 human HCC line was significantly better than that expressed in the immortalized hepatic cell line；the mRNA of Rab27B in 3 human HCC lines and the immortalized hepatic cell line were significantly expression but there was no significantly difference. Conclusion Rab27A and Rab27B expression are closely correlated HCC，it can provide the clinical reasonable diagnostic measures as valuable effective reference basis.

[Key words] Rab27A；Rab27B；Hepatocellular carcinoma；RT-PCR；Western blot

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，具有極高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，出現(xiàn)典型癥狀時，往往已經(jīng)為晚期。目前與HCC進展相關(guān)的因子包括癌胚抗原（CEA）、糖類抗原（CA199）、異常凝血酶原（DCP）等，同時Rab家族被證實與腫瘤密切相關(guān)。本文采用RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測了Rab27A與Rab27B在3種人肝癌細胞系及1種永生化肝細胞系中的表達情況，以期進一步研究其對肝癌細胞生物學特性的影響，為原發(fā)性肝癌的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

3種人肝癌細胞HepG2、Huh-7、Li-7及1種永生化肝細胞系HL-7702均采購自中國科學院上海生科院細胞資源中心，并按照其建議的方法進行培養(yǎng)。20%胎牛血清、RPMI 1640培養(yǎng)基、DMEM高糖培養(yǎng)液購自GIBCO公司，DEPC購自Sigma公司，ECL顯色試劑盒購自Thermo-fisher公司，NC膜購自Amersham公司，引物、Rab27A兔多抗、Rab27B羊多抗、HRP標記驢抗兔IgG、β-actin購自生工生物工程公司，Trizol、Taq PCR試劑盒購自TaKara公司，PCR反應(yīng)儀采用Thermocycler（Biometra Germany公司），Alphaimager 2200分析儀（Alpha Innotech，San Leandro，CA公司），其他常規(guī)化學試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 各種細胞均按照標準方法進行培養(yǎng)，傳代時用2.5 g/L的胰蛋白酶消化， 按1∶3的比例傳代。取生長狀態(tài)良好、密度80%～90%的細胞用于實驗。

1.2.2 RT-PCR Rab27A基因引物F：5′-AACCGCCACAGTCTTCAATC-3′，R：5′-TCCCTGACCCTTCAAT-CAAC-3′；Rab27B基因引物F：5′-CCCTAAAAATCCCAGTCCATC-3′，R：5′-GAGCATCCCAGAGGAAACAC-3′。反應(yīng)過程如下：94℃預(yù)變性2 min，94℃變性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸60 s，最后72℃終延伸5 min，β-actin作為內(nèi)參，擴增30個循環(huán)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物行1%瓊脂糖凝膠電泳，采用凝膠成像系統(tǒng)分析結(jié)果。隨后對細胞系中的Rab27A與Rab27B mRNA的表達水平進行全定量PCR。

1.2.3 Western blot SDS-PAGE分離蛋白，每個樣品的上樣量為50 μg，電轉(zhuǎn)至NC膜。5%脫脂牛奶4℃封閉1 h，孵育一抗Rab27A（1∶1000稀釋）或Rab27B（1∶1200稀釋），4℃過夜。倒掉一抗溶液，用TBST漂洗液濾膜3次，每次10 min。加入相應(yīng)種屬的辣根過氧化物酶標記的二抗溶液（1∶10 000稀釋），搖床上緩慢搖動，37℃ 2 h。倒掉二抗溶液，用TBST漂洗液濾膜3次，每次10 min。最后采用ECL試劑盒顯影，定影，觀察雜交信號。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

通過采用RT-PCR、Western blot分析了3種人肝癌及1種人永生化肝細胞系中Rab27A及Rab27B mRNA及蛋白表達情況。β-actin內(nèi)參條帶在205 bp處皆顯現(xiàn)明亮且無明顯差異，Rab27A mRNA在357 bp處3種人肝癌細胞系中明顯亮于1種人永生化肝細胞系；Rab27B mRNA在302 bp處均出現(xiàn)目的條帶，且條帶清晰；實驗重復(fù)3次。結(jié)果表明Rab27A mRNA在3種人肝癌細胞系中表達明顯強于1種人永生化肝細胞系；Rab27B mRNA在3種人肝癌及1種人永生化肝細胞系中均明顯表達但無顯著差異（圖1）。其中，β-actin作為內(nèi)參。

A

3 討論

HCC是一種嚴重威脅人類生命的惡性腫瘤，發(fā)生率位居全球惡性腫瘤發(fā)病率第5位，死亡率位居全球惡性腫瘤發(fā)病率第3位，全球每年死于HCC患者人數(shù)高達69.6萬，其中超過50%的肝癌新發(fā)患者與死亡患者來自中國[1-2]。HCC的侵襲和轉(zhuǎn)移過程涉及到腫瘤細胞的增殖、黏附、遷移和侵襲等過程，而這一過程正是通過多種因子間的相互協(xié)調(diào)來實現(xiàn)。2013年諾貝爾生理學和醫(yī)學獎表彰詹姆斯?羅思曼等人發(fā)現(xiàn)細胞的囊泡運輸調(diào)控機制，表明細胞膜的分裂與囊泡運輸時細胞膜裂解是一致的。細胞的生命活動依賴于細胞內(nèi)運輸體系的精細結(jié)構(gòu)和控制結(jié)構(gòu)，通過與目標細胞膜融合，在神經(jīng)細胞指令下可精確控制激素、生物酶、神經(jīng)遞質(zhì)等分子傳遞的恰當時間與位置。RabGTP酶類作為機體內(nèi)一組與內(nèi)膜運輸相關(guān)的調(diào)節(jié)蛋白，可以作為囊泡運輸?shù)姆肿娱_關(guān)，與GTP結(jié)合則有活性，與GDP結(jié)合則無活性，通過與上游調(diào)控因子和下游特異效應(yīng)因子相互作用，影響細胞的分泌、胞吞、信號轉(zhuǎn)導及發(fā)育，并可以控制膜結(jié)構(gòu)的一致性和囊泡的形成、轉(zhuǎn)運、黏附、錨定、融合等過程，從而發(fā)揮重要的作用[3-4]。

人類Rab蛋白廣泛分布于各種生物細胞內(nèi)不同的膜結(jié)構(gòu)上，是小分子GTP結(jié)合蛋白家族中最大的亞家族，包括超過60個成員組成，可以通過不同的可變剪切形式而產(chǎn)生各種功能特異的亞型[5-6]。Rab家族可以通過特異性地定位于胞質(zhì)中某些亞細胞器從而發(fā)揮特殊的功能，而抑制其中一些蛋白的表達，細胞膜的裂解次數(shù)可明顯減少[7]。Rab27亞家族包括Rab27A與Rab27B，兩者是具有71%同源性的小GTP 酶（20～29 kD），可以通過影響囊泡運輸物質(zhì)來抑制機體免疫監(jiān)視功能，并為腫瘤細胞提供理想的生存環(huán)境，促進血管生成及腫瘤細胞增殖轉(zhuǎn)移[8]。Rab27A在人類染色點15q15-21.1，調(diào)節(jié)因子有3種：Rab親和蛋白，Slac2和Muncl3-4，功能主要為特異性地調(diào)節(jié)囊泡出胞過程，促進囊泡與細胞膜融合，并且激活溶酶體，促進細胞膜裂解[9]。Rab27A參與細胞色素顆粒的轉(zhuǎn)運，若表達缺失會導致色素沉著消失和黑素小體轉(zhuǎn)運功能缺陷，從而導致一種罕見的常染色體隱性遺傳性疾病――格里塞利綜合征（GS）[10-11]。Rab27A通過與Melanophilin和肌漿球蛋白Ⅴa共同形成一個三元復(fù)合體，參與粗細肌絲的滑行運動，因此有學者認為Rab27A具有肌球蛋白受體的全部或部分功能[12]。研究表明Rab27A可以通過調(diào)節(jié)VEGF、cyclin D1、IGF-2、MMP-9、MMP-7和p16蛋白的表達，從而在腫瘤細胞體內(nèi)增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮促進作用[13]。Rab27B位于18號染色體上，調(diào)節(jié)因子有3種：突出結(jié)合蛋白4（Slp4），Slac2b和Noc2，功能主要為參與大多數(shù)分泌性細胞的胞吐作用及運輸過程，促進囊泡物質(zhì)由細胞質(zhì)向細胞膜區(qū)域運動，在腦垂體、腮腺腺泡細胞、胰腺腺泡細胞的胞吐作用及血小板致密核心顆粒的分泌中有重要的調(diào)節(jié)作用[14-16]。有研究表明，抑制uPA和HGF的胞外水平的表達，HCC的侵襲和轉(zhuǎn)移能力均顯著下降。

近來研究發(fā)現(xiàn)，Rab27A與乳腺癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞等多種腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；Rab27B表達于乳腺、肝臟、胃、大腸、脾、眼、心臟、腎臟等多種腫瘤細胞[16-20]。本實驗采用RT-PCR及Western blot技術(shù)，檢測Rab27A與Rab27B mRNA在3種人肝癌細胞HepG2、Huh-7、Li-7及1種永生化肝細胞系HL-7702中的表達，筆者發(fā)現(xiàn)，Rab27A與Rab27B在肝癌細胞系及原發(fā)性肝癌組織中存在差異性表達，Rab27A mRNA在3種人肝癌細胞系中表達明顯強于1種人永生化肝細胞系；Rab27B mRNA在3種人肝癌及1種人永生化肝細胞系中均明顯表達但無顯著差別。因此，根據(jù)上述實驗結(jié)果，Rab27A與Rab27B與HCC密切相關(guān)，可以為臨床采取合理診斷措施提供有效的參考依據(jù)。

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