【摘要】目的從馬齒莧煎煮液在治療消化道急、慢性感染中的臨床實效，分析馬齒莧煎煮液治療消化道感染性疾病的原理。方法將馬齒莧煎煮液，直接應(yīng)用于多種腸道致病菌所引起的消化道急、慢性感染病例。結(jié)果馬齒莧煎煮濾液口服治療急性腸道感染，不僅對致菌有直接殺滅或抑制作用，而且有胃腸道黏膜損傷的修復(fù)和調(diào)整功能,同時還補充了因腹瀉導(dǎo)致的水與電解質(zhì)失衡。結(jié)論在未經(jīng)輸液和其他處理的條件下，僅服用馬齒莧煎煮液，治愈了急性腸道感染,證明馬齒莧是一種理想的腸道生物“抗生素”。

【關(guān)鍵詞】馬齒莧；煎煮濾出液；急性胃腸道感染

馬齒莧是我國一種古老的藥食兼用植物，在千百年中國醫(yī)學(xué)的臨床應(yīng)用中證實對多種致病菌有明顯的抗菌作用，并有生物“抗生素”之稱的美譽，但其抗菌原理仍不明確，需要我們研究與證實。筆者將馬齒莧的煎煮劑長期應(yīng)用于因各種腸道致病菌所引起的消化道疾病的治療中，收到十分明顯的臨床效果?，F(xiàn)報道如下。

1典型病例報道

男，56歲，進(jìn)食過夜變質(zhì)的雞蛋炒飯后30min腹痛，頻繁嘔吐、腹瀉，嘔吐初為胃內(nèi)容物，繼為膽汁；腹瀉物初為清粥樣便，繼為洗肉水樣物，6h內(nèi)嘔吐、腹瀉數(shù)10次，皮膚黏膜呈嚴(yán)重脫水，眼睛明顯凹陷，從發(fā)病開始，在家自用黃連素0.3g，痢特靈0.2g，維生素C，維生素B6等口服，每次服后約十余分鐘，均又因嘔吐被吐出，6h內(nèi)共用藥3次，為防止脫水，吐瀉間隙，共服用糖、鹽溫開水約3000ml，雖經(jīng)上述處理，但6h內(nèi)無小便，癥狀、體征均無明顯好轉(zhuǎn)，并出現(xiàn)心律加快、脈壓差縮小等休克早期臨床表現(xiàn)。

根據(jù)其病史及細(xì)菌學(xué)檢查診斷為沙門氏菌屬急性胃腸炎。隨后用本地產(chǎn)新鮮馬齒莧250g洗凈，用冷水約1000ml急火煎開后，再用文火煎煮10min，取其濾出液約800ml，涼至約30℃口服，服后再未嘔吐，約1h后，患者大便1次，瀉出物為含有馬齒莧殘葉的果漿樣清稀便。并按上述方法將原馬齒莧再煎煮1次，1h后再口服。此后，患者腹痛逐漸緩解，且無吐、瀉，并于第1次口服馬齒莧煎煮濾出液后約1.5h，患者進(jìn)行發(fā)病后的第1次小便。第2天，早餐進(jìn)稀粥約500ml，同時按前法，再用馬齒莧煎煮劑維持應(yīng)用1d?；颊呋究祻?fù)。

摘要:一些實驗研究及臨床資料證明,有些抗菌藥尤其是β-內(nèi)酰胺類抗生素在治療革蘭氏陰性菌感染時,有誘導(dǎo)大量內(nèi)毒素釋放的副作用,在臨床上可能引起或加重內(nèi)毒素血癥。不同類型抗菌藥誘導(dǎo)內(nèi)毒素釋放的程度與其對不同類型青霉素結(jié)合蛋白(PBP)的親和性有關(guān),抗菌藥與PBP3或PBP2結(jié)合所造成的內(nèi)毒素釋放的量較高。因此在抗菌藥的研究設(shè)計中,除了要考慮其殺菌效力外,還應(yīng)考慮可能誘導(dǎo)內(nèi)毒素釋放的問題。在敗血癥治療中也應(yīng)采取合理的治療方案,以防止或減輕內(nèi)毒素血癥的發(fā)生。

關(guān)鍵詞:抗菌藥內(nèi)毒素青霉素結(jié)合蛋白

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜中的脂多糖成分,具有廣泛的生物活性。內(nèi)毒素對機體造成雙重影響:少量內(nèi)毒素刺激機體時,能增強特異性及非特異性免疫力,誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素等;而大量內(nèi)毒素進(jìn)入機體循環(huán)時,可造成廣泛而強烈的病理反應(yīng),如彌漫性血管內(nèi)凝血、多器官功能衰竭及休克等。內(nèi)毒素在革蘭氏陰性桿菌引起的感染性休克中起著關(guān)鍵作用[1－3]。對于革蘭氏陰性菌敗血癥病人,有些廣譜抗菌藥能有效地控制菌血癥,但是臨床資料證明病人的死亡率仍然很高,其原因可能與抗菌藥誘導(dǎo)細(xì)菌釋放內(nèi)毒素有關(guān)[4,5]。由于在抗菌藥治療的過程中,隨著細(xì)菌的裂解,內(nèi)毒素從細(xì)菌的細(xì)胞壁外膜釋放后進(jìn)入血液循環(huán),因而可能加重內(nèi)毒素血癥,從而促進(jìn)一系列的炎癥反應(yīng),造成機體嚴(yán)重而廣泛的病理損傷。

1抗菌藥誘導(dǎo)的內(nèi)毒素釋放

在體外細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)中,已發(fā)現(xiàn)多種抗菌藥如β-內(nèi)酰胺類[6~8]、氨基糖苷類[9]、氟喹諾酮類藥物[10]等均能引起不同程度的內(nèi)毒素釋放,其中β-內(nèi)酰胺類抗生素(如氨芐西林,頭孢噻肟,頭孢他啶,氨曲南等)能誘導(dǎo)多種細(xì)菌包括野生菌和突變菌(如大腸埃希氏菌,銅綠假單胞菌[6~8],肺炎克雷伯氏菌[11],流感嗜血菌[12]等)釋放大量的內(nèi)毒素,在這些抗菌藥處理的細(xì)菌培養(yǎng)上清液中能檢測到內(nèi)毒素含量比無抗菌藥處理者高幾倍甚至幾十倍。β-內(nèi)酰胺類抗生素誘導(dǎo)的內(nèi)毒素釋放常常與其造成的細(xì)菌溶解伴隨發(fā)生,并與細(xì)菌溶解程度有一定關(guān)系。內(nèi)毒素-細(xì)胞因子級聯(lián)反應(yīng)所造成的全身炎癥過程是發(fā)生內(nèi)毒素休克的重要環(huán)節(jié)?？咕幾饔糜诩?xì)菌后,由于細(xì)菌裂解及伴隨的內(nèi)毒素釋放到培養(yǎng)上清液中,其上清液可刺激巨噬細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生大量的腫瘤壞死因子(TNF)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)[13~15],這些炎性因子的大量產(chǎn)生可促進(jìn)內(nèi)毒素休克的發(fā)生。

有些動物體內(nèi)實驗可觀察到與體外實驗一致的結(jié)果。給大腸埃希氏菌性腹膜炎家兔注射慶大霉素后,動物血液中細(xì)菌數(shù)量急劇減少,但血漿中內(nèi)毒素含量較未治療者明顯增高[9]。用氨芐西林治療幼年大鼠流感嗜血菌性腹膜炎,造成較多的內(nèi)毒素釋放入血液循環(huán)[12]。燒傷后感染肺炎克雷伯氏菌的敗血癥小鼠,經(jīng)頭孢他啶、氨曲南、亞胺培南治療后,小鼠血液中內(nèi)毒素含量明顯增高,同時內(nèi)毒素激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL-6[16]。大腸埃希氏菌性腦膜炎家兔,經(jīng)美羅培南和頭孢噻肟治療后,在腦脊液中可檢測到高含量的內(nèi)毒素,同時腦脊液中TNF濃度也增高[17]。不同類型的抗菌藥所誘導(dǎo)的內(nèi)毒素釋放水平有所不同,如拉氧頭孢對菌血癥的清除作用與慶大霉素相似,但其誘導(dǎo)內(nèi)毒素釋放的量比慶大霉素高20倍[18]。用D-半乳糖胺處理小鼠后,再造成大腸埃希氏菌性腹膜炎模型,發(fā)現(xiàn)用頭孢他啶治療比用亞胺培南治療引起更多的小鼠死亡,推測頭孢他啶誘導(dǎo)更多的內(nèi)毒素釋放[19]。

［摘要］抗菌肽是一種由少量氨基酸殘基組成且具有抗菌活性的堿性生物短肽。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，抗菌肽是水產(chǎn)動物非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分，對水產(chǎn)養(yǎng)殖有著極為重要的作用?；诖?，本文概述抗菌肽的分類、作用機理、抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用，并對抗菌肽的應(yīng)用前景進(jìn)行展望。

［關(guān)鍵詞］抗菌肽；水產(chǎn)養(yǎng)殖；作用機理

抗菌肽是具有抗菌活性的一類多肽，瑞典科學(xué)家G.Boman等在1980年發(fā)現(xiàn)世界上第一例抗菌肽，并定名為Cecropinss。如今在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，工廠化養(yǎng)殖越來越普遍，但隨著養(yǎng)殖密度的增大，水產(chǎn)動物的患病率隨之上升。傳統(tǒng)情況下，養(yǎng)殖者會使用漁藥或其他抗生素緩解問題，但隨著抗生素的大量使用，各種弊端逐漸顯露出來，如病菌抗藥性增強、對環(huán)境的污染嚴(yán)重、對人體健康有害等?？咕牡膽?yīng)用可以避免出現(xiàn)這些問題，并且相比于抗生素，抗菌肽具有廣譜抗菌活性，可以快速殺死病原體，包括革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、細(xì)菌、寄生蟲等，而且其副作用小，有不錯的穩(wěn)定性和溶解性，可以說是抗生素的最合適的替代物，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中有不錯的應(yīng)用前景。

1抗菌肽的分類

按照來源，抗菌肽可分為六大類，即昆蟲抗菌肽，哺乳動物抗菌肽，兩棲動物抗菌肽，魚類、軟體動物、甲殼動物抗菌肽，植物抗菌肽，細(xì)菌抗菌肽。昆蟲抗菌肽是在昆蟲血淋巴中產(chǎn)生的短肽，如果昆蟲受到病原體的刺激，就會產(chǎn)生大量的抗菌肽［1］，而且大多數(shù)都帶正電。兩棲動物抗菌肽主要是從其皮膚腺體中分泌而來［2］。就貝類抗菌肽而言，目前研究較為透徹的是鮑和貽貝抗菌肽。鮑抗菌肽的活性隨著病原體誘導(dǎo)時間的增長而加強；于貽貝抗菌肽最為主要的特點是Cys殘基含量高，可以形成的二硫鍵個數(shù)較多［3］。魚類抗菌肽是比較龐大的一部分，雖然對魚類抗菌肽的研究有些晚，但其重要性還是不可小覷的。魚類抗菌肽的種類是很多的，不同魚類含有的抗菌肽也不盡相同。魚類抗菌肽不僅種類多，其含量也比較大，從魚類的器官、黏液、血液或組織中都可以提取抗菌肽。Conlon等［4］提取的富含精氨酸和半胱氨酸的抗菌肽來源于海七鰓鰻的皮膚，并發(fā)現(xiàn)其氨基酸排列序列與兔分泌的抗菌肽氨基酸排列順序相近。Huang等［5］研究表明炎癥和右旋糖酐鐵能夠影響某些魚抗菌肽的分泌。除了根據(jù)來源分類之外，還可以根據(jù)其一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)來進(jìn)行分類，可分為富含脯氨酸的抗菌肽、有分子內(nèi)二硫鍵的抗菌肽、富含甘氨酸的抗菌肽及含兩性分子α-螺旋的抗菌肽［6］。

2抗菌肽的作用機制

1抗菌肽的來源

1.1昆蟲抗菌肽

昆蟲是世界上種類最多的生物類群，具有高度的適應(yīng)能力和有效的防御機制，昆蟲沒有B或T淋巴細(xì)胞，體液中也沒有免疫球蛋白存在，它們通過體內(nèi)一套特殊的內(nèi)部防御機制來殺滅或抑制外來物。在殺滅病原菌時，抗菌肽起著重要的作用。

1.2微生物抗菌肽

長期的生物進(jìn)化過程使某些微生物種產(chǎn)生拮抗物質(zhì)來抑制或殺死其他種群，以便在競爭中處于有利地位，抗菌肽就是一種重要的拮抗物質(zhì)。微生物抗菌肽研究中，對乳桿菌抗菌肽的研究比較廣泛和深入。

1.3植物抗菌肽

青霉素的發(fā)現(xiàn)使人們對由病原微生物感染而引發(fā)的各類疾病不再束手無策,并由此發(fā)展了大量的β-內(nèi)酰胺類抗生素,對保護(hù)人類健康作出了巨大貢獻(xiàn)。但隨著上述“傳統(tǒng)抗生素”的廣泛使用,不斷產(chǎn)生出諸多新問題。如β-內(nèi)酰胺類抗生素的過敏反應(yīng)以及長期使用導(dǎo)致抗藥菌株的產(chǎn)生。于是人們開始尋找新一代抗菌劑。近期的研究發(fā)現(xiàn),某些陽離子型多肽具有廣譜的抗菌活性,同時具有“傳統(tǒng)抗生素”無法比擬的優(yōu)越性:不會誘導(dǎo)抗藥菌株的產(chǎn)生,有希望成為新一代抗菌劑[1]。

抗菌肽(antimicrobialpeptides)是具有抗菌活性短肽的總稱。1975年瑞典科學(xué)家G.Boman等人[2]等從惜古比天蠶(Hyatophoracecropia)蛹中誘導(dǎo)分離得到一種殺菌肽,并將其命名為cecropin。此后,許多抗菌肽相繼被分離、純化。一些抗菌肽的氨基酸一級結(jié)構(gòu)和基因序列得到確定。80年代,有關(guān)抗菌肽的研究主要集中在大型的經(jīng)濟(jì)昆蟲。90年代以來,在繼續(xù)對大型經(jīng)濟(jì)昆蟲進(jìn)行研究的同時,又?jǐn)U展到一些小型昆蟲和其它無脊椎及脊椎動物,抗菌肽已成為免疫學(xué)和分子生物學(xué)研究的熱點。研究的內(nèi)容包括:抗菌肽的分離與純化,氨基酸序列的分析,蛋白質(zhì)構(gòu)型與功能的關(guān)系,抗菌肽的作用機理[3,4],應(yīng)用基因工程克隆與表達(dá)抗菌肽基因,改造合成抗菌肽基因以及動植物的轉(zhuǎn)抗菌肽基因工程等,其中昆蟲抗菌肽基因工程研究最受重視[5,6]。目前已發(fā)現(xiàn)抗菌肽或類似抗菌肽的小分子肽類廣泛存在于生物界,包括細(xì)菌、動植物和人類。這種內(nèi)源性的抗菌肽經(jīng)誘導(dǎo)而合成,在機體抵抗病原的入侵方面起著重要的作用,更被認(rèn)為是缺乏特異性免疫功能生物的重要防御成分?？咕木哂袕V譜殺菌作用,大多數(shù)對革蘭氏陽性菌有較強的殺滅作用,有些則對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均起作用。對某些真菌、原生動物,尤其對耐藥性細(xì)菌有殺滅作用,并能選擇殺傷腫瘤細(xì)胞,抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制。

1.抗菌肽的分類

迄今為止從不同生物體內(nèi)誘導(dǎo)的抗菌肽已不下200種,僅從昆蟲體內(nèi)分離獲得的就多達(dá)170余種。根據(jù)抗菌肽的結(jié)構(gòu),可將其分為5類:(1)單鏈無半胱氨酸(Cys)的抗菌肽,或由無規(guī)則卷曲連接的兩段а-螺旋組成的肽。該類包括天蠶素Cecropins,Magainins等。Magainins最初是從非洲爪蟾的皮膚中發(fā)現(xiàn)的,它是爪蟾的皮膚在一定的環(huán)境壓力下分泌出的抗感染和促進(jìn)傷口愈合的成分,由兩個緊密相連的肽鏈組成,每一個肽鏈有23個氨基酸,低濃度便可抑制許多細(xì)菌和真菌生長[7]。(2)富含某些氨基酸殘基但不含Cys的抗菌肽。如富含脯氨酸(Pro)或甘氨酸(Gly)殘基的抗菌肽。如從豬腸內(nèi)分離的抗菌肽PR39中Pro含量占49%[6]。鞘翅肽Coleoptericin和半翅肽Hemiptericin的全序中富含Gly[8]。(3)含一個二硫鍵的抗菌肽,該二硫鍵的位置通常在肽鏈C端。如爪蟾皮膚細(xì)胞中產(chǎn)生的Brevinins[9]。(4)有兩個或兩個以上二硫鍵,具有β折疊結(jié)構(gòu)的抗菌肽。如綠蠅防御素(Phormindefensin),分子內(nèi)有6個Cys形成3個分子內(nèi)二硫鍵,肽鏈C末段是帶有擬β轉(zhuǎn)角的反向平行的β片層[10]。實驗證明,分子中的二硫鍵在其抗菌作用中至關(guān)重要。(5)由其他已知功能較大的多肽衍生而來的具有抗菌活力的肽。

2.抗菌肽的作用及機理

2.1抗菌肽的抗菌作用及其機理抗菌肽分子可以在細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜上穿孔而形成離子孔道,造成細(xì)菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞,引起胞內(nèi)水溶性物質(zhì)大量滲出,而最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡?？咕姆肿邮紫冉Y(jié)合在質(zhì)膜上,接著其分子中的疏水段和兩親性α-螺旋也插入到質(zhì)膜中,最終通過膜內(nèi)分子間的相互位移,抗菌肽分子聚集形成離子性通道,使細(xì)菌失去了膜勢而死亡[10-14]。但是,Gazit[15]等得出的實驗結(jié)果表明,抗菌肽只是結(jié)合到了單位膜的表面上,并未插入膜中,更未形成通道。然而,抗菌肽的作用靶部位是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜,以及抗菌肽的作用結(jié)果是導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)膜通透性增大等基本內(nèi)容是確切無疑的,這也正是抗菌肽與青霉素等傳統(tǒng)抗生素對細(xì)菌作用機制不同的本質(zhì)所在。

抗菌藥物在現(xiàn)代臨床上占有重要的一席之地，但近年來由于藥物新品種的不斷開發(fā)使用，臨床不合理應(yīng)用抗菌藥物導(dǎo)致機體細(xì)菌耐藥菌株的不斷增加，醫(yī)源性感染在感染性疾病中也越來越突出。當(dāng)前我國抗菌藥物臨床應(yīng)用面臨幾大問題，如何提高抗菌藥物使用的規(guī)范化管理，成為當(dāng)前亟待解決的問題。

1我國臨床抗菌藥物的應(yīng)用現(xiàn)狀

1.1抗菌藥物適應(yīng)癥選擇不當(dāng)

隨著抗菌藥物品種的不斷開發(fā)和投入臨床使用，醫(yī)師有越來越多的抗菌藥物選擇余地，但部分醫(yī)師往往出于經(jīng)濟(jì)目的不分疾病種類和病情程度，只選擇價格昂貴的抗菌藥物；有的醫(yī)師在每次用抗菌藥物時只習(xí)慣性的選擇為數(shù)甚少的幾種藥物，沒有顧忌到患者的實際病情；有的醫(yī)師對患者長期使用單一抗菌藥物產(chǎn)生的耐藥性重視不夠，仍然持續(xù)使用該藥物，造成病情加重；對于感冒發(fā)熱患者，除非有局部誘發(fā)感染，否則并不具備使用抗菌藥物的使用指征，可部分醫(yī)師出于經(jīng)濟(jì)目的考慮仍然為患者開具大量抗菌藥物，告知患者是預(yù)防感染。這種不顧患者抗菌藥物使用指征濫用抗菌藥物的現(xiàn)象尤其以小型的私人醫(yī)院或鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院、個人診所為多。

1.2抗菌藥物之間的聯(lián)合應(yīng)用不當(dāng)

為了增強療效或者患者感染病原體較復(fù)雜，臨床會在少數(shù)情況下使用幾種抗菌藥物聯(lián)合使用，而多數(shù)細(xì)菌感染只需要使用一種抗菌藥物治療即可解決。但令人擔(dān)憂的是有許多醫(yī)師在聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物治療時，不注意用藥指征和藥物之間的協(xié)同作用，甚至兩種抗菌藥物會產(chǎn)生拮抗作用，導(dǎo)致治療失敗。聯(lián)合用藥不當(dāng)兩種同類抗菌藥物時，不良反應(yīng)和毒副反應(yīng)均會增高，如β-內(nèi)酰胺聯(lián)合應(yīng)用會導(dǎo)致腎毒性增加，抗真菌藥物聯(lián)合應(yīng)用使血液、肝腎毒性增加，兩種氨基糖苷類合用，療程過程會增加耳、腎等毒性；大環(huán)內(nèi)酯類與β-內(nèi)酰胺類藥物同時使用可降低治療效果，產(chǎn)生藥物拮抗作用。

1例肝移植術(shù)后患兒多發(fā)肝膿腫，患兒治療中涉及抗感染、抗排異反應(yīng)、抗凝等多方面的內(nèi)容，筆者在藥師介入該患兒的用藥治療，主要針對其抗感染治療過程中的問題進(jìn)行分析和干預(yù)，協(xié)助臨床處理患兒的感染問題，取得一定效果。

1病例簡介

患兒，男，2歲9個月，因膽道閉鎖于2010年1月28日行劈離式肝移植手術(shù)。術(shù)后病情平穩(wěn)。入院前1周無明顯誘因發(fā)熱，體溫(T)最高39.5℃，在當(dāng)?shù)蒯t(yī)院診斷為反流性膽管炎，先后給予美羅培南、頭孢哌酮/舒巴坦抗感染，患兒仍發(fā)熱，間斷腹瀉，2010年5月26日轉(zhuǎn)入我院治療，診斷為反流性膽管炎。入院后查體患兒發(fā)熱體溫T39.2℃，白細(xì)胞(WBC)22.1×109?L－1，初步診斷為反流性膽管炎。B超示移植肝實質(zhì)回聲不均，肝內(nèi)多發(fā)低回聲區(qū)，門靜脈流速輕度偏低，肝內(nèi)膽管擴張，行腹部核磁共振(MRI)檢查顯示肝內(nèi)多發(fā)異常信號，診斷為肝膿腫。在全麻下由CT引導(dǎo)行S2段肝膿腫穿刺引流術(shù)，留取膿液培養(yǎng)回報:大腸埃希菌、銅綠假單胞菌。應(yīng)用美羅培南抗感染。藥師于2010年7月1日介入該患兒的治療，患兒肌酐(Cr)12.9mmol?L－1，尿素氮(BUN)3.24μmol?L－1，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)分別為42.5IU?L－1，45.4IU?L－1。考慮患兒的目前狀況，藥師從幾個方面配合醫(yī)生進(jìn)行抗菌治療的藥學(xué)監(jiān)護(hù)，患兒經(jīng)過3個多月的治療，肝膿腫治愈出院。

2藥學(xué)監(jiān)護(hù)點

2.1明確肝膿腫的治療現(xiàn)狀及患兒的疾病特點細(xì)菌性肝膿腫是細(xì)菌感染引起的一種起病急、病情重的化膿性疾病，是肝膽外科常見的嚴(yán)重疾病。近年來發(fā)病率有上升趨勢，以往該病病死率較高，未經(jīng)治療的肝膿腫有95%～100%的死亡率［1］。不及時有效治療，也可威脅患者生命，死亡率達(dá)6%～14%［2］。肝膿腫為原位肝移植術(shù)后罕見并發(fā)癥，其發(fā)生率為1.0%～2.8%［3］。非移植肝膿腫患者治愈率雖可達(dá)90%以上，但Tachopoulou等［4］報道12例原位肝移植后肝膿腫病例治愈率僅為58%。因此對于移植后肝膿腫的治療至關(guān)重要。該患兒的感染特點為年齡小、肝移植術(shù)后、長期使用激素及鈣調(diào)磷酸酶類免疫抑制劑治療、肝膿腫多發(fā)、膽汁反流造成感染反復(fù)、病原菌致病力強且不易殺滅、抗菌療程長等。上述疾病特點造成目前細(xì)菌感染的難治性。治療主要在膿腫穿刺引流的基礎(chǔ)上，采取藥物抗感染治療。

2.2對目前患兒抗菌藥物治療方案的評估及分析根據(jù)《抗菌藥物臨床應(yīng)用指導(dǎo)原則》［5］，對本例肝膿腫患兒的治療情況進(jìn)行評估，原則中腹腔感染疾病包括膽道感染和細(xì)菌性肝膿腫，通常為腸桿菌科細(xì)菌、腸球菌屬和擬桿菌屬等厭氧菌的混合感染。該患兒膿液中檢出的大腸埃希菌為腹腔感染常見病原菌，而銅綠假單胞菌為較難治愈的G－性桿菌，僅用一種美羅培南難以控制感染，經(jīng)驗需要采用聯(lián)合治療的方式。由于患者年齡小，不適用于氟喹諾酮類藥物，而藥敏結(jié)果顯示對三代頭孢菌素類藥物耐藥，雖然氨基糖苷類藥物對小兒有較高耳腎毒性發(fā)生的可能性，但患兒感染嚴(yán)重，又為肝移植術(shù)后，且入院前已反復(fù)應(yīng)用多種抗菌藥物效果不明顯，因此在密切監(jiān)護(hù)的情況下，可以使用該類藥物與碳青霉烯類藥物聯(lián)用治療銅綠假單胞菌和大腸埃希菌引起的肝膿腫。在碳青霉烯類抗菌藥物中繼續(xù)選擇美羅培南治療的目的在于其對肝腎的影響弱于亞胺培南/西司他汀鈉。

摘要：抗菌肽一般是由7~100個氨基酸組成的小分子多肽，具有廣譜抗菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生蟲、抗原蟲、抑殺腫瘤細(xì)胞和調(diào)節(jié)免疫等多種生物學(xué)活性，在水產(chǎn)健康養(yǎng)殖中具有廣闊的應(yīng)用前景。文章綜述了抗菌肽的生物學(xué)活性以及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用，闡述了國內(nèi)外的研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞：抗菌肽；生物學(xué)活性；水產(chǎn)養(yǎng)殖

抗菌肽（AntibacterialPeptide，AMPs）又叫宿主防御肽（HostDefencePeptide，HDPs），通常是由7~100個氨基酸組成的小分子多肽[1]，是生物體天然免疫防御系統(tǒng)的一個重要組成部分[2]，也是各種生物抵御入侵病原體的第一道防線[3]?？咕木哂袕V譜抗細(xì)菌[4]、抗真菌[5]、抗病毒[6]、抗寄生蟲[7]、抑殺腫瘤細(xì)胞[8]和免疫調(diào)節(jié)[9]等生物學(xué)活性?？咕膹V泛存在于哺乳動物、兩棲動物、魚、植物、昆蟲、棘皮動物、甲殼類動物、真菌和細(xì)菌中[10]。據(jù)APD抗菌肽數(shù)據(jù)庫報道（截至2019年11月），已經(jīng)有3056種天然抗菌肽被鑒定、分離出來，其中來自細(xì)菌344種、古細(xì)菌5種、原蟲8種、真菌20種、植物352種、動物2327種[11]?？咕呐c抗生素相比，具有不易產(chǎn)生耐藥性、對宿主毒性最小、廣譜活性、快速殺滅等優(yōu)點[12-13]。這些特性使抗菌肽被認(rèn)為是克服抗生素耐藥性的最佳替代者[10]，是戰(zhàn)勝細(xì)菌的新武器[1]。近年來，抗菌肽及其應(yīng)用研究已成為醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)、食品領(lǐng)域的研究熱點之一。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用各種抗菌肽，可以提高水產(chǎn)動物的生產(chǎn)性能、消化酶活性、抗氧化和免疫功能。

1抗菌肽的生物學(xué)活性

研究表明，天然AMPs對革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌、真菌、病毒和真核寄生蟲具有廣譜活性[14-16]。1.1抗細(xì)菌活性。目前，關(guān)于抗菌肽的抗菌活性研究最多[17]。多數(shù)抗菌肽通過攻擊細(xì)胞膜而殺死細(xì)菌[18]，而一些抗菌肽則通過抑制細(xì)胞內(nèi)途徑如DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)合成等來殺死細(xì)[19]。例如Mutacin-1140為一種由變形鏈球菌（Streptococcusmutans）產(chǎn)生的22個氨基酸肽，他抑制肽聚糖（PGN）的合成。Mutacin-1140具有廣譜抗菌活性，包括萬古霉素耐藥腸球菌（Enterococcus）和金黃色葡萄球菌（S.aureus）[20-21]。另外，乳酸乳球菌（Lactococcuslactis）產(chǎn)生的乳酸鏈球菌肽（Nisin），是由34個氨基酸和一些不常見的氨基酸組成，其與細(xì)菌膜相互作用并破壞其完整性[22]。李榮榮等[23]研究表明，雞源Fowlicidin-3抗菌肽對致病性大腸桿菌K99、雞白痢沙門氏菌和金黃色葡萄球菌均具有抑殺作用。王煒等[24]研究發(fā)現(xiàn)，天蠶素成熟肽可有效抑制大腸埃希菌株（Escherichiacoli）及多重耐藥菌株的生長，其抑菌效果優(yōu)于多種抗生素。Wang等[25]研究發(fā)現(xiàn)，從蛙類皮膚中提取的抗菌肽Limnochariin-1，對15個菌株，其中革蘭陽性菌4株，革蘭陰性菌11株細(xì)菌都具有很好的抗菌活性。1.2抗真菌活性料研究?？咕牟粌H具有廣譜抗細(xì)菌活性，同時具有較強的抗真菌活性。DeLucca等[26]最初提出了抗菌肽對真菌的作用機制，包括真菌細(xì)胞溶解和對真菌細(xì)胞壁合成的干擾。天冬氨酸肽（Cathelicidin）類，如SMAP-29、BMAP-27、BMAP-28等通過膜通透性和膜損傷迅速破壞白色念珠菌（Candidaalbicans）和新生隱球菌（Cryptococcusneoformans）細(xì)胞[27]。但也有證據(jù)表明，AMPs還通過其他的作用方式如干擾細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮其作用[28]。Vylkova等[29]研究發(fā)現(xiàn)，人β-防御素2和人β-防御素3對白色念珠菌的破壞，并不引起細(xì)胞膜紊亂或溶解，而具有能量依賴性和鹽敏感性。幾丁質(zhì)是真菌細(xì)胞壁的主要組成部分，已被證明能選擇性地結(jié)合抗菌肽[30]。Rautenbach等[31]報道，幾種植物衍生AMPs包括Pp-AMP1/2、Tu-AMP1/2和Ac-AFP1/2具有凝集素樣活性，與真菌幾丁質(zhì)結(jié)合強烈，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)肌動蛋白骨架發(fā)生改變。這種幾丁質(zhì)的分解已被證明危害真菌細(xì)胞形態(tài)和膜完整性。Wang等[25]研究發(fā)現(xiàn)，從蛙類皮膚中提取的抗菌肽Limnochariin-1，不僅對細(xì)菌，對3種真菌也具有抗菌活性。1.3抗寄生蟲和原蟲活性?？辜纳x肽的分子量相對較小[28]。雖然寄生蟲通常是多細(xì)胞的生物，但抗寄生蟲肽的作用機制是通過破壞細(xì)胞膜的完整性來殺死細(xì)胞。Jenssen等[15]報道，抗寄生蟲肽對抗各種寄生蟲，包括利什曼原蟲（Leishmania）和布氏錐蟲（Trypanosomabrucei）都具有殺滅活性的作用。1.4抗病毒活性?？共《倦囊驯蛔C明能抑制各種包膜RNA和DNA病毒的病毒感染[15]?？咕牡目共《净钚允峭ㄟ^直接破壞病毒包膜或間接干擾病毒與目標(biāo)宿主細(xì)胞的結(jié)合來介導(dǎo)[28]。硫酸乙酰肝素和在宿主細(xì)胞表面帶負(fù)電荷的糖胺聚糖分子對單純皰疹病毒（HSV）的黏附起著關(guān)鍵作用。如抗病毒的a-螺旋肽乳鐵蛋白通過與肝素分子結(jié)合和阻止病毒-受體相互作用來干擾HSV的侵入[32]。哺乳動物α-和β-防御素，它們對包膜病毒和非包膜病毒都有抗病毒作用[33]。1.5抗癌活性。由于抗菌肽對細(xì)菌和癌細(xì)胞的作用機制相似，一些兩親性a螺旋AMPs具有抗癌特性。Lu等[34]研究發(fā)現(xiàn)，從果蠅中分離的抗菌肽SK84可以特異性地抑制人多種癌細(xì)胞系（白血病THP-1、肝癌HepG2和乳腺癌MCF-7細(xì)胞）的增殖，而無溶血活性?？咕耐ㄟ^與特定細(xì)胞表面糖蛋白的親和力而對癌細(xì)胞具有選擇性的殺傷作用[35]。研究表明，Sapecin作為一種含有KLK基序的陽離子抗菌肽，與宿主細(xì)胞膜上帶負(fù)電荷的唾液酸殘基發(fā)生相互作用[36]。Deslouches等[37]研究發(fā)現(xiàn)，MAGIIN-2及其類似物對造血細(xì)胞和實體腫瘤細(xì)胞顯示出快速和選擇性的細(xì)胞毒性活性（12mg/mL）。相反，其對正常淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性不明顯，即使在高達(dá)200mg/mL?？咕牡目咕⒖拱┗钚缘南嚓P(guān)因素及其分子機制之間的確切關(guān)系尚不清楚[38]。1.6免疫調(diào)節(jié)活性。越來越多的證據(jù)表明，抗菌肽通過與其抗菌活性無關(guān)的機制保護(hù)宿主免受細(xì)菌的侵害?？咕氖窍忍煨院瓦m應(yīng)性免疫的效應(yīng)分子，具有促炎和抗炎反應(yīng)、趨化活性和對適應(yīng)性免疫的直接作用[39-41]。Shan等[42]報道乳鐵蛋白促進(jìn)外周血和脾淋巴細(xì)胞增殖，有效提高斷奶仔豬血清IgG、IgA、IgM和IL-2水平。Ren等[43]發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬日糧中添加由豬防御素和蒼蠅抗菌肽組成的復(fù)合抗菌肽，可顯著增加T細(xì)胞數(shù)量、增強外周血T細(xì)胞增殖、降低脾細(xì)胞凋亡率，表明抗菌肽能明顯改善斷奶仔豬細(xì)胞免疫功能。在肉雞中，兔圓小囊抗菌肽和豬源抗菌肽分別顯著改善腸黏膜免疫[44-45]。此外，豬源抗菌肽還可顯著增加特定無病原雞腸道分泌性IgA的表達(dá)。這有力支持了豬抗菌肽可增強腸黏膜免疫的假設(shè)[46]。

2抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用